பாஸ்போரிலேஷன், முதன்மை வளர்ச்சி சீராக்கியான டெல்லாவைச் செயல்படுத்துவதன் மூலம், அரபிடாப்சிஸில் ஹிஸ்டோன் H2A குரோமாடினுடன் பிணைவதை ஊக்குவிக்கிறது.

டெல்லா புரதங்கள் பாதுகாக்கப்படுகின்றனவளர்ச்சி கட்டுப்பாட்டாளர்கள்உள் மற்றும் வெளி சமிக்ஞைகளுக்கு ஏற்ப தாவர வளர்ச்சியில் மையப் பங்கு வகிக்கின்றன. படியெடுத்தல் ஒழுங்குபடுத்திகளாக, டெல்லாக்கள் தங்களின் GRAS டொமைன்கள் வழியாக படியெடுத்தல் காரணிகள் (TFs) மற்றும் ஹிஸ்டோன் H2A உடன் பிணைந்து, புரோமோட்டர்களில் செயல்படத் தூண்டப்படுகின்றன. டெல்லாவின் நிலைத்தன்மை, மொழிபெயர்ப்புக்குப் பிந்தைய நிலையில் இரண்டு வழிமுறைகளால் ஒழுங்குபடுத்தப்படுகிறது என்று சமீபத்திய ஆய்வுகள் காட்டுகின்றன: தாவர ஹார்மோனால் தூண்டப்படும் பாலியூபிகுயிட்டினேஷன்.கிப்பரெல்லின்இது அவற்றின் விரைவான சிதைவுக்கு வழிவகுக்கிறது, மற்றும் சிறிய யூபிகுவின் போன்ற மாற்றி (SUMO) உடனான இணைப்பு, அவற்றின் திரட்சியை அதிகரிக்கிறது. மேலும், டெல்லாவின் செயல்பாடு இரண்டு தனித்துவமான கிளைகோசைலேஷன் வழிமுறைகளால் மாறும் வகையில் கட்டுப்படுத்தப்படுகிறது: O-ஃபுகோசைலேஷன் டெல்லா-TF இடைவினையை மேம்படுத்துகிறது, அதேசமயம் O-இணைக்கப்பட்ட N-அசிடைல்குளுகோசமைன் (O-GlcNAc) மாற்றம் டெல்லா-TF இடைவினையைத் தடுக்கிறது. இருப்பினும், டெல்லா பாஸ்போரிலேஷனின் பங்கு தெளிவாக இல்லை, ஏனெனில் முந்தைய ஆய்வுகள் முரண்பாடான முடிவுகளைக் காட்டியுள்ளன; சில ஆய்வுகள் பாஸ்போரிலேஷன் டெல்லா சிதைவை ஊக்குவிக்கிறது அல்லது அடக்குகிறது என்றும், மற்றவை பாஸ்போரிலேஷன் அவற்றின் நிலைத்தன்மையை பாதிக்காது என்றும் கூறுகின்றன. இங்கே, அரபிடோப்சிஸ் தாலியானாவிலிருந்து மாஸ் ஸ்பெக்ட்ரோமெட்ரி மூலம் தூய்மைப்படுத்தப்பட்ட GA1-3 அடக்கி (RGA) ஆன AtDELLA-வில் உள்ள பாஸ்போரிலேஷன் தளங்களை நாங்கள் அடையாளம் காண்கிறோம். மேலும், PolyS மற்றும் PolyS/T பகுதிகளில் உள்ள இரண்டு RGA பெப்டைடுகளின் பாஸ்போரிலேஷன், H2A பிணைப்பை ஊக்குவிப்பதன் மூலமும், இலக்கு ஊக்குவிப்பாளர்களுடன் RGA இணைவதன் மூலமும் RGA செயல்பாட்டை மேம்படுத்துகிறது என்பதைக் காட்டுகிறோம். குறிப்பிடத்தக்க வகையில், பாஸ்போரிலேஷன் RGA-TF இடைவினைகளையோ அல்லது RGA நிலைத்தன்மையையோ பாதிக்கவில்லை. பாஸ்போரிலேஷன் டெல்லா செயல்பாட்டைத் தூண்டும் மூலக்கூறு வழிமுறையை எங்கள் ஆய்வு வெளிப்படுத்துகிறது.
GA-குறைபாடுள்ள Ga1 மரபணுப் பின்னணியில், RGA-வில் Pep1 மற்றும் Pep2 ஆகிய இரண்டும் அதிக அளவில் பாஸ்போரிலேற்றம் செய்யப்பட்டிருந்ததை எங்களின் நிறை நிறமாலை பகுப்பாய்வு வெளிப்படுத்தியது. இந்த ஆய்வைத் தவிர, பாஸ்போபுரோட்டியோமிக் ஆய்வுகளும் RGA-வில் Pep1 பாஸ்போரிலேற்றத்தை வெளிப்படுத்தியுள்ளன, இருப்பினும் அதன் பங்கு இன்னும் ஆய்வு செய்யப்படவில்லை53,54,55. இதற்கு மாறாக, Pep2 பாஸ்போரிலேற்றம் இதற்கு முன்னர் விவரிக்கப்படவில்லை, ஏனெனில் இந்த பெப்டைடை RGAGKG டிரான்ஸ்ஜீனைப் பயன்படுத்தி மட்டுமே கண்டறிய முடிந்தது. Pep1 பாஸ்போரிலேற்றத்தை நீக்கிய m1A சடுதிமாற்றம், தாவரத்தினுள் RGA செயல்பாட்டை சிறிதளவு மட்டுமே குறைத்தபோதிலும், அது m2A உடன் இணைந்தபோது RGA செயல்பாட்டைக் குறைப்பதில் ஒரு கூட்டு விளைவைக் கொண்டிருந்தது (துணைப் படம் 6). முக்கியமாக, ga1 உடன் ஒப்பிடும்போது GA-மேம்படுத்தப்பட்ட sly1 சடுதிமாற்றத்தில் Pep1 பாஸ்போரிலேற்றம் குறிப்பிடத்தக்க அளவில் குறைக்கப்பட்டது, இது GA ஆனது RGA பாஸ்போரிலேற்ற நீக்கத்தை ஊக்குவித்து, அதன் செயல்பாட்டைக் குறைக்கிறது என்பதைக் காட்டுகிறது. GA ஆனது RGA பாஸ்போரிலேற்றத்தை அடக்கும் வழிமுறைக்கு மேலும் ஆய்வு தேவைப்படுகிறது. அடையாளம் காணப்படாத ஒரு புரத கைனேஸின் ஒழுங்குமுறை மூலம் இது அடையப்படுகிறது என்பது ஒரு சாத்தியமாகும். அரிசியில் GA-ஆல் CK1 புரத கைனேஸ் EL1-இன் வெளிப்பாடு குறைக்கப்படுகிறது என்று ஆய்வுகள் காட்டியிருந்தாலும்41, அரபிடாப்சிஸ் EL1 ஹோமோலாக் (AEL1-4)-இன் உயர்-வரிசை சடுதிமாற்றங்கள் RGA பாஸ்போரைலேஷனைக் குறைப்பதில்லை என்று எங்கள் முடிவுகள் குறிப்பிடுகின்றன. எங்கள் முடிவுகளுக்கு இணங்க, அரபிடாப்சிஸ் AEL-ஐ அதிகமாக வெளிப்படுத்தும் மரபணுத்தொகுதிகள் மற்றும் ஒரு ael மும்முனை சடுதிமாற்றியைப் பயன்படுத்தி சமீபத்தில் மேற்கொள்ளப்பட்ட ஒரு பாஸ்போபுரோட்டியோமிக் ஆய்வில், இந்த கைனேஸ்களின் அடிமூலக்கூறுகளாக எந்த டெல்லா புரதங்களும் அடையாளம் காணப்படவில்லை56. நாங்கள் இந்தக் கையெழுத்துப் பிரதியைத் தயாரித்தபோது, ​​கோதுமையில் (Triticum aestivum) ஒரு GSK3/SHAGGY-போன்ற கைனேஸைக் குறியிடும் மரபணுவான GSK3, டெல்லாவை (Rht-B1b) பாஸ்போரைலேட் செய்ய முடியும் என்று தெரிவிக்கப்பட்டது57, இருப்பினும் தாவரத்தினுள் GSK3-ஆல் Rht-B1b-இன் பாஸ்போரைலேஷன் உறுதிப்படுத்தப்படவில்லை. GSK3 முன்னிலையில் ஆய்வகத்தில் நிகழ்த்தப்பட்ட நொதி வினைகள் மற்றும் அதைத் தொடர்ந்து செய்யப்பட்ட நிறை நிறமாலையியல் பகுப்பாய்வு, Rht-B1b-இன் டெல்லா மற்றும் GRAS டொமைன்களுக்கு இடையில் அமைந்துள்ள மூன்று பாஸ்போரைலேஷன் தளங்களை வெளிப்படுத்தின (துணைப்படம் 3). மூன்று பாஸ்போரிலேஷன் தளங்களிலும் செரைனை அலனைனாக மாற்றுவது, மரபணு மாற்றப்பட்ட கோதுமையில் Rht-B1b செயல்பாட்டைக் குறைத்தது. இது, Pep2 RGA-வில் அலனைன் மாற்றங்கள் RGA செயல்பாட்டைக் குறைத்தன என்ற எங்கள் கண்டுபிடிப்புகளுடன் ஒத்துப்போகிறது. இருப்பினும், இன் விட்ரோ புரதச் சிதைவு சோதனைகள், பாஸ்போரிலேஷன் Rht-B1b57-ஐ நிலைப்படுத்தவும் முடியும் என்பதை மேலும் நிரூபித்தன. இது, Pep2 RGA-வில் அலனைன் மாற்றங்கள் தாவரத்தினுள் அதன் நிலைத்தன்மையை மாற்றுவதில்லை என்று காட்டும் எங்கள் முடிவுகளுக்கு முரணாக உள்ளது. கோதுமையில் உள்ள GSK3 என்பது அரபிடாப்சிஸில் உள்ள பிராசினோஸ்டீராய்டு-உணர்வற்ற புரதம் 2 (BIN2)-இன் ஆர்த்தோலாக் ஆகும் 57. BIN2 என்பது BR சமிக்ஞையின் ஒரு எதிர்மறை ஒழுங்குபடுத்தியாகும், மேலும் BR, BIN2 சிதைவை ஏற்படுத்துவதன் மூலம் அதன் சமிக்ஞைப் பாதையைச் செயல்படுத்துகிறது 58. BR சிகிச்சையானது அரபிடாப்சிஸில் RGA நிலைத்தன்மையையோ 59 அல்லது பாஸ்போரிலேஷன் அளவுகளையோ குறைக்கவில்லை என்பதை நாங்கள் காட்டினோம் (துணைப் படம் 2), இது RGA, BIN2-ஆல் பாஸ்போரிலேட் செய்யப்படுவதற்கு வாய்ப்பில்லை என்பதைக் குறிக்கிறது.
அனைத்து அளவுசார் தரவுகளும் எக்செல் (Excel) மென்பொருளைப் பயன்படுத்தி புள்ளிவிவர ரீதியாகப் பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டன, மேலும் குறிப்பிடத்தக்க வேறுபாடுகள் ஸ்டூடண்ட்ஸ் டி-டெஸ்ட் (Student's t-test) மூலம் கண்டறியப்பட்டன. மாதிரி அளவை முன்கூட்டியே தீர்மானிக்க எந்தப் புள்ளிவிவர முறைகளும் பயன்படுத்தப்படவில்லை. பகுப்பாய்விலிருந்து எந்தத் தரவும் விலக்கப்படவில்லை; பரிசோதனை சீரற்ற முறையில் நடத்தப்படவில்லை; மேலும், பரிசோதனை மற்றும் விளைவு மதிப்பீட்டின் போது ஆய்வாளர்கள் ஒதுக்கீட்டை அறிந்திருந்தனர். மாதிரி அளவுகள் பட விளக்கங்களிலும் மூலத் தரவுக் கோப்புகளிலும் வழங்கப்பட்டுள்ளன.