பாஸ்போரிலேஷன் முதன்மை வளர்ச்சி சீராக்கியான DELLA-வை செயல்படுத்துகிறது, அரபிடோப்சிஸில் குரோமாடினுடன் ஹிஸ்டோன் H2A பிணைப்பை ஊக்குவிக்கிறது.

டெல்லா புரதங்கள் பாதுகாக்கப்படுகின்றன.வளர்ச்சி கட்டுப்பாட்டாளர்கள்உட்புற மற்றும் வெளிப்புற சமிக்ஞைகளுக்கு பதிலளிக்கும் விதமாக தாவர வளர்ச்சியில் மையப் பங்கு வகிக்கின்றன. டிரான்ஸ்கிரிப்ஷனல் ரெகுலேட்டர்களாக, டெல்லாக்கள் அவற்றின் GRAS டொமைன்கள் வழியாக டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் காரணிகள் (TFகள்) மற்றும் ஹிஸ்டோன் H2A உடன் பிணைக்கப்பட்டு, ஊக்குவிப்பாளர்களில் செயல்பட ஆட்சேர்ப்பு செய்யப்படுகின்றன. சமீபத்திய ஆய்வுகள், டெல்லா நிலைத்தன்மை இரண்டு வழிமுறைகளால் மொழிபெயர்ப்புக்குப் பிறகு கட்டுப்படுத்தப்படுகிறது என்பதைக் காட்டுகின்றன: தாவர ஹார்மோனால் தூண்டப்பட்ட பாலியூபிக்விடினேஷன்.கிப்பெரெலின், இது அவற்றின் விரைவான சிதைவுக்கு வழிவகுக்கிறது, மேலும் சிறிய யூபிக்விடின் போன்ற மாற்றியமைப்பாளருடன் (SUMO) இணைகிறது, இது அவற்றின் திரட்சியை அதிகரிக்கிறது. மேலும், DELLA செயல்பாடு இரண்டு தனித்துவமான கிளைகோசைலேஷன் வழிமுறைகளால் மாறும் வகையில் கட்டுப்படுத்தப்படுகிறது: O-ஃபுகோசைலேஷன் DELLA-TF தொடர்புகளை மேம்படுத்துகிறது, அதேசமயம் O-இணைக்கப்பட்ட N-அசிடைல்க்ளூகோசமைன் (O-GlcNAc) மாற்றம் DELLA-TF தொடர்புகளைத் தடுக்கிறது. இருப்பினும், முந்தைய ஆய்வுகள் முரண்பாடான முடிவுகளைக் காட்டியுள்ளதால், DELLA பாஸ்போரிலேஷனின் பங்கு தெளிவாக இல்லை, சிலர் பாஸ்போரிலேஷன் DELLA சிதைவை ஊக்குவிக்கிறது அல்லது அடக்குகிறது என்றும், மற்றவர்கள் பாஸ்போரிலேஷன் அவற்றின் நிலைத்தன்மையை பாதிக்காது என்றும் கூறுகின்றனர். இங்கே, அரபிடோப்சிஸ் தாலியானாவிலிருந்து மாஸ் ஸ்பெக்ட்ரோமெட்ரி மூலம் சுத்திகரிக்கப்பட்ட GA1-3 ரெப்ரசர் (RGA), AtDELLA இல் உள்ள பாஸ்போரிலேஷன் தளங்களை நாங்கள் அடையாளம் காண்கிறோம், மேலும் பாலிஸ் மற்றும் பாலிஸ்/டி பகுதிகளில் இரண்டு RGA பெப்டைட்களின் பாஸ்போரிலேஷன் H2A பிணைப்பு மற்றும் இலக்கு ஊக்குவிப்பாளர்களுடன் RGA தொடர்பை ஊக்குவிப்பதன் மூலம் RGA செயல்பாட்டை மேம்படுத்துகிறது என்பதைக் காட்டுகிறோம். குறிப்பிடத்தக்க வகையில், பாஸ்போரிலேஷன் RGA-TF தொடர்புகளையோ அல்லது RGA நிலைத்தன்மையையோ பாதிக்கவில்லை. எங்கள் ஆய்வு, பாஸ்போரிலேஷன் டெல்லா செயல்பாட்டைத் தூண்டும் ஒரு மூலக்கூறு பொறிமுறையை வெளிப்படுத்துகிறது.
எங்கள் நிறை நிறமாலை பகுப்பாய்வு, GA-குறைபாடுள்ள Ga1 பின்னணியில் RGA இல் Pep1 மற்றும் Pep2 இரண்டும் அதிக பாஸ்போரிலேட்டட் செய்யப்பட்டிருப்பதை வெளிப்படுத்தியது. இந்த ஆய்வுக்கு கூடுதலாக, பாஸ்போபுரோட்டியோமிக் ஆய்வுகள் RGA இல் Pep1 பாஸ்போரிலேஷனையும் வெளிப்படுத்தியுள்ளன, இருப்பினும் அதன் பங்கு இன்னும் ஆய்வு செய்யப்படவில்லை53,54,55. இதற்கு நேர்மாறாக, இந்த பெப்டைடை RGAGKG டிரான்ஸ்ஜீனைப் பயன்படுத்தி மட்டுமே கண்டறிய முடியும் என்பதால் Pep2 பாஸ்போரிலேஷன் முன்னர் விவரிக்கப்படவில்லை. Pep1 பாஸ்போரிலேஷனை ஒழித்த m1A பிறழ்வு, தாவரங்களில் RGA செயல்பாட்டை சற்று குறைத்தாலும், RGA செயல்பாட்டைக் குறைப்பதில் m2A உடன் இணைந்தபோது அது ஒரு சேர்க்கை விளைவைக் கொண்டிருந்தது (துணை படம் 6). முக்கியமாக, ga1 உடன் ஒப்பிடும்போது GA-மேம்படுத்தப்பட்ட ஸ்லை1 விகாரத்தில் Pep1 பாஸ்போரிலேஷனில் கணிசமாகக் குறைக்கப்பட்டது, இது GA RGA டிபாஸ்போரிலேஷனை ஊக்குவிக்கிறது, அதன் செயல்பாட்டைக் குறைக்கிறது என்பதைக் குறிக்கிறது. GA RGA பாஸ்போரிலேஷனை அடக்கும் வழிமுறைக்கு மேலும் விசாரணை தேவைப்படுகிறது. அடையாளம் காணப்படாத புரத கைனேஸை ஒழுங்குபடுத்துவதன் மூலம் இது அடையப்படுகிறது என்பது ஒரு சாத்தியக்கூறு. CK1 புரத கைனேஸ் EL1 இன் வெளிப்பாடு அரிசியில் GA ஆல் குறைக்கப்படுவதாக ஆய்வுகள் காட்டினாலும்41, அரபிடோப்சிஸ் EL1 ஹோமோலாக் (AEL1-4) இன் உயர்-வரிசை பிறழ்வுகள் RGA பாஸ்போரிலேஷனைக் குறைக்காது என்பதை எங்கள் முடிவுகள் குறிப்பிடுகின்றன. எங்கள் முடிவுகளுடன் உடன்படும் வகையில், அரபிடோப்சிஸ் AEL மிகைப்படுத்தப்பட்ட கோடுகள் மற்றும் ஒரு ஏஎல் டிரிபிள் மியூட்டண்ட் ஆகியவற்றைப் பயன்படுத்தி நடத்தப்பட்ட சமீபத்திய பாஸ்போபுரோட்டியோமிக் ஆய்வு, இந்த கைனேஸ்களின் அடி மூலக்கூறுகளாக எந்த DELLA புரதங்களையும் அடையாளம் காணவில்லை56. நாங்கள் கையெழுத்துப் பிரதியைத் தயாரித்தபோது, ​​கோதுமையில் GSK3/SHAGGY போன்ற கைனேஸை குறியாக்கம் செய்யும் மரபணுவான GSK3, DELLA (Rht-B1b)57 ஐ பாஸ்போரிலேட் செய்ய முடியும் என்று தெரிவிக்கப்பட்டது, இருப்பினும் GSK3 ஆல் Rht-B1b இன் பாஸ்போரிலேஷன் தாவரத்தில் உறுதிப்படுத்தப்படவில்லை. GSK3 முன்னிலையில் இன் விட்ரோ என்சைமடிக் எதிர்வினைகளைத் தொடர்ந்து மாஸ் ஸ்பெக்ட்ரோமெட்ரி பகுப்பாய்வு Rht-B1b இன் DELLA மற்றும் GRAS டொமைன்களுக்கு இடையில் அமைந்துள்ள மூன்று பாஸ்போரிலேஷன் தளங்களை வெளிப்படுத்தியது (துணை படம் 3). மூன்று பாஸ்போரிலேஷன் தளங்களிலும் செரினுக்கு அலனைனுக்கு மாற்றீடுகள் செய்யப்பட்டதால், மரபணு மாற்றப்பட்ட கோதுமையில் Rht-B1b செயல்பாடு குறைந்தது, இது Pep2 RGA இல் உள்ள அலனைன் மாற்றீடுகள் RGA செயல்பாட்டைக் குறைத்தன என்ற எங்கள் கண்டுபிடிப்புகளுடன் ஒத்துப்போகிறது. இருப்பினும், இன் விட்ரோ புரதச் சிதைவு மதிப்பீடுகள், பாஸ்போரிலேஷன் Rht-B1b57 ஐ உறுதிப்படுத்த முடியும் என்பதை மேலும் நிரூபித்தன. Pep2 RGA இல் உள்ள அலனைன் மாற்றீடுகள் தாவரத்தில் அதன் நிலைத்தன்மையை மாற்றாது என்பதைக் காட்டும் எங்கள் முடிவுகளுக்கு இது முரணானது. கோதுமையில் உள்ள GSK3 என்பது அரபிடோப்சிஸ் 57 இல் பிராசினோஸ்டீராய்டு-உணர்வற்ற புரதம் 2 (BIN2) இன் ஆர்த்தோலாக் ஆகும். BIN2 என்பது BR சமிக்ஞையின் எதிர்மறை சீராக்கி, மேலும் BR என்பது BIN2 சிதைவை ஏற்படுத்துவதன் மூலம் அதன் சமிக்ஞை பாதையை செயல்படுத்துகிறது 58. BR சிகிச்சையானது அரபிடோப்சிஸில் RGA நிலைத்தன்மை 59 அல்லது பாஸ்போரிலேஷன் அளவைக் குறைக்காது என்பதைக் காட்டினோம் (துணை படம் 2), இது RGA BIN2 ஆல் பாஸ்போரிலேட்டட் செய்யப்பட வாய்ப்பில்லை என்பதைக் குறிக்கிறது.
அனைத்து அளவு தரவுகளும் எக்செல் பயன்படுத்தி புள்ளிவிவர ரீதியாக பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டன, மேலும் மாணவர்களின் டி-சோதனையைப் பயன்படுத்தி குறிப்பிடத்தக்க வேறுபாடுகள் தீர்மானிக்கப்பட்டன. மாதிரி அளவை முன்கூட்டியே தீர்மானிக்க எந்த புள்ளிவிவர முறைகளும் பயன்படுத்தப்படவில்லை. பகுப்பாய்விலிருந்து எந்த தரவும் விலக்கப்படவில்லை; சோதனை சீரற்றதாக இல்லை; மேலும் சோதனை மற்றும் விளைவு மதிப்பீட்டின் போது ஒதுக்கீட்டை ஆராய்ச்சியாளர்கள் அறிந்திருந்தனர். மாதிரி அளவுகள் உருவ லெஜெண்டுகளிலும் மூல தரவு கோப்புகளிலும் வழங்கப்பட்டுள்ளன.