ஆன்டெல்மிண்டிக் மருந்து N,N-டைதைல்-எம்-டோலுஅமைடு (டீட்) ACHE (அசிடைல்கொலினெஸ்டரேஸ்) தடுப்பதாகவும், அதிகப்படியான வாஸ்குலரைசேஷன் காரணமாக புற்றுநோய் உண்டாக்கும் பண்புகளைக் கொண்டிருப்பதாகவும் தெரிவிக்கப்பட்டுள்ளது. இந்த ஆய்வறிக்கையில், DEET குறிப்பாக ஆஞ்சியோஜெனீசிஸை ஊக்குவிக்கும் எண்டோடெலியல் செல்களைத் தூண்டுகிறது, இதன் மூலம் கட்டி வளர்ச்சியை அதிகரிக்கிறது என்பதைக் காட்டுகிறோம். DEET, பெருக்கம், இடம்பெயர்வு மற்றும் ஒட்டுதல் உள்ளிட்ட ஆஞ்சியோஜெனீசிஸுக்கு வழிவகுக்கும் செல்லுலார் செயல்முறைகளை செயல்படுத்துகிறது. இது எண்டோடெலியல் செல்களில் அதிகரித்த NO உற்பத்தி மற்றும் VEGF வெளிப்பாட்டுடன் தொடர்புடையது. M3 ஐ அமைதிப்படுத்துவது அல்லது மருந்தியல் M3 தடுப்பான்களைப் பயன்படுத்துவது இந்த விளைவுகள் அனைத்தையும் ஒழித்தது, DEET- தூண்டப்பட்ட ஆஞ்சியோஜெனீசிஸ் M3- உணர்திறன் கொண்டது என்பதைக் குறிக்கிறது. எண்டோடெலியல் மற்றும் HEK செல்களில் கால்சியம் சிக்னலிங் சம்பந்தப்பட்ட சோதனைகள் M3 ஏற்பிகளை அதிகமாக வெளிப்படுத்துகின்றன, அத்துடன் பிணைப்பு மற்றும் டாக்கிங் ஆய்வுகள், DEET M3 ஏற்பிகளின் அலோஸ்டெரிக் மாடுலேட்டராக செயல்படுகிறது என்பதைக் குறிக்கிறது. மேலும், DEET ACHE ஐத் தடுக்கிறது, இதன் மூலம் அசிடைல்கொலினின் உயிர் கிடைக்கும் தன்மையையும் M3 ஏற்பிகளுடன் அதன் பிணைப்பையும் அதிகரிக்கிறது, மேலும் அலோஸ்டெரிக் ஒழுங்குமுறை மூலம் புரோஆஞ்சியோஜெனிக் விளைவுகளை மேம்படுத்துகிறது.
முதன்மை ECகள் சுவிஸ் எலிகளின் பெருநாடியிலிருந்து தனிமைப்படுத்தப்பட்டன. பிரித்தெடுக்கும் முறை கோபயாஷி நெறிமுறையிலிருந்து தழுவி எடுக்கப்பட்டது 26. நான்காவது பத்தி வரை 5% வெப்ப-செயல்படுத்தப்படாத FBS உடன் கூடுதலாக EBM-2 ஊடகத்தில் முரைன் ECகள் வளர்க்கப்பட்டன.
HUVEC, U87MG, அல்லது BF16F10 இன் பெருக்கத்தில் இரண்டு செறிவு DEET இன் விளைவு CyQUANT செல் பெருக்க மதிப்பீட்டு கருவி (மூலக்கூறு ஆய்வுகள், C7026) ஐப் பயன்படுத்தி பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டது. சுருக்கமாக, ஒரு கிணற்றில் 5.103 செல்கள் 96-கிணறு தட்டில் விதைக்கப்பட்டு, ஒரே இரவில் இணைக்க அனுமதிக்கப்பட்டு, பின்னர் 24 மணிநேரத்திற்கு DEET உடன் சிகிச்சையளிக்கப்பட்டன. வளர்ச்சி ஊடகத்தை அகற்றிய பிறகு, மைக்ரோபிளேட்டின் ஒவ்வொரு கிணற்றிலும் சாய பிணைப்பு கரைசலைச் சேர்த்து, செல்களை 30 நிமிடங்களுக்கு 37 °C வெப்பநிலையில் அடைகாக்கவும். 485 nm தூண்டுதல் வடிகட்டிகள் மற்றும் 530 nm உமிழ்வு வடிகட்டிகளுடன் பொருத்தப்பட்ட மித்ராஸ் LB940 மல்டிமோட் மைக்ரோபிளேட் ரீடரை (பெர்த்தோல்ட் டெக்னாலஜிஸ், பேட் வைல்ட்பேட், ஜெர்மனி) பயன்படுத்தி ஃப்ளோரசன்ஸ் அளவுகள் தீர்மானிக்கப்பட்டன.
ஒரு கிணற்றுக்கு 104 செல்கள் அடர்த்தியில் 96 கிணறு தகடுகளில் HUVEC விதைக்கப்பட்டது. செல்கள் DEET உடன் 24 மணிநேரம் சிகிச்சையளிக்கப்பட்டன. கலர்மெட்ரிக் MTT மதிப்பீட்டைப் (சிக்மா-ஆல்ட்ரிச், M5655) பயன்படுத்தி செல் நம்பகத்தன்மை மதிப்பிடப்பட்டது. 570 nm அலைநீளத்தில் மல்டிமோட் மைக்ரோபிளேட் ரீடரில் (மித்ராஸ் LB940) ஆப்டிகல் அடர்த்தி மதிப்புகள் பெறப்பட்டன.
DEET இன் விளைவுகள் இன் விட்ரோ ஆஞ்சியோஜெனெசிஸ் மதிப்பீடுகளைப் பயன்படுத்தி ஆய்வு செய்யப்பட்டன. 10-8 M அல்லது 10-5 M DEET உடன் சிகிச்சையானது HUVEC களில் தந்துகி நீளம் உருவாவதை அதிகரித்தது (படம் 1a, b, வெள்ளை பார்கள்). கட்டுப்பாட்டுக் குழுவுடன் ஒப்பிடும்போது, 10-14 முதல் 10-5 M வரையிலான DEET செறிவுகளுடன் சிகிச்சையானது, தந்துகி நீளம் 10-8 M DEET இல் ஒரு பீடபூமியை அடைந்ததைக் காட்டியது (துணை படம் S2). 10-8 M மற்றும் 10-5 M செறிவு வரம்பில் DEET உடன் சிகிச்சையளிக்கப்பட்ட HUVEC களின் இன் விட்ரோ புரோஆஞ்சியோஜெனிக் விளைவில் குறிப்பிடத்தக்க வேறுபாடு எதுவும் காணப்படவில்லை.
நியோவாஸ்குலரைசேஷனில் DEET இன் விளைவைத் தீர்மானிக்க, நாங்கள் இன் விவோ நியோவாஸ்குலரைசேஷன் ஆய்வுகளை மேற்கொண்டோம். 14 நாட்களுக்குப் பிறகு, 10-8 M அல்லது 10-5 M DEET உடன் முன் வளர்ப்பு செய்யப்பட்ட எண்டோடெலியல் செல்களை செலுத்திய எலிகளில் ஹீமோகுளோபின் உள்ளடக்கத்தில் குறிப்பிடத்தக்க அதிகரிப்பு காணப்பட்டது (படம் 1c, வெள்ளை பார்கள்).
மேலும், DEET-தூண்டப்பட்ட நியோவாஸ்குலரைசேஷன் U87MG xenograft-bearing எலிகளில் ஆய்வு செய்யப்பட்டது, அவை 10-5 M பிளாஸ்மா செறிவுகளைத் தூண்டும் என்று அறியப்பட்ட டோஸில் DEET உடன் தினமும் (ip) செலுத்தப்பட்டன, இது வெளிப்படும் மனிதர்களில் இயல்பானது. 23 இல். கண்டறியக்கூடிய கட்டிகள் (அதாவது கட்டிகள் >100 மிமீ3) எலிகளுக்குள் U87MG செல்களை செலுத்திய 14 நாட்களுக்குப் பிறகு காணப்பட்டன. 28 ஆம் நாளில், கட்டுப்பாட்டு எலிகளுடன் ஒப்பிடும்போது DEET-சிகிச்சையளிக்கப்பட்ட எலிகளில் கட்டி வளர்ச்சி கணிசமாக அதிகரித்தது (படம் 1d, சதுரங்கள்). மேலும், கட்டிகளின் CD31 கறை படிதல், DEET நுண்குழாய்களின் பகுதியை கணிசமாக அதிகரித்தது, ஆனால் நுண்குழாய்களின் அடர்த்தியை அல்ல என்பதைக் காட்டியது. (படம் 1e–g).
DETA- தூண்டப்பட்ட பெருக்கத்தில் மஸ்கரினிக் ஏற்பிகளின் பங்கைத் தீர்மானிக்க, pFHHSiD (10-7 M, ஒரு தேர்ந்தெடுக்கப்பட்ட M3 ஏற்பி எதிரி) முன்னிலையில் 10-8 M அல்லது 10-5 M DETA பயன்படுத்தப்பட்டது. HUVEC. pFHHSiD சிகிச்சையானது அனைத்து செறிவுகளிலும் DETA இன் பெருக்க பண்புகளை முற்றிலுமாகத் தடுத்தது (அட்டவணை 1).
இந்த நிலைமைகளின் கீழ், DEET HUVEC செல்களில் தந்துகி நீளத்தை அதிகரிக்குமா என்பதையும் நாங்கள் ஆய்வு செய்தோம். இதேபோல், pFHHSiD DEET- தூண்டப்பட்ட தந்துகி நீளத்தை கணிசமாகத் தடுத்தது (படம் 1a, b, சாம்பல் நிற பார்கள்). மேலும், M3 siRNA உடன் இதே போன்ற சோதனைகள் செய்யப்பட்டன. கட்டுப்பாட்டு siRNA தந்துகி உருவாவதை ஊக்குவிப்பதில் பயனுள்ளதாக இல்லாவிட்டாலும், M3 மஸ்கரினிக் ஏற்பியை அமைதிப்படுத்துவது தந்துகி நீளத்தை அதிகரிக்கும் DEET இன் திறனை ஒழித்தது (படம் 1a, b, கருப்பு பார்கள்).
மேலும், 10-8 M அல்லது 10-5 M DEET-தூண்டப்பட்ட வாஸ்குலரைசேஷன் இன் விட்ரோ மற்றும் நியோவாஸ்குலரைசேஷன் இன் விவோ இரண்டும் pFHHSiD ஆல் முழுமையாகத் தடுக்கப்பட்டன (படம் 1c, d, வட்டங்கள்). தேர்ந்தெடுக்கப்பட்ட M3 ஏற்பி எதிரிகள் அல்லது M3 siRNA க்கு உணர்திறன் கொண்ட பாதை வழியாக DEET ஆஞ்சியோஜெனீசிஸை ஊக்குவிக்கிறது என்பதை இந்த முடிவுகள் குறிப்பிடுகின்றன.
ACHE என்பது DEET இன் மூலக்கூறு இலக்காகும். ACHE தடுப்பான்களாகச் செயல்படும் டோடெபெசில் போன்ற மருந்துகள், இன் விட்ரோ மற்றும் மவுஸ் ஹிண்ட்லிம்ப் இஸ்கெமியா மாதிரிகளில் EC ஆஞ்சியோஜெனீசிஸைத் தூண்டும். HUVEC இல் ACHE நொதி செயல்பாட்டில் DEET இன் இரண்டு செறிவுகளின் விளைவை நாங்கள் சோதித்தோம். கட்டுப்பாட்டு நிலைமைகளுடன் ஒப்பிடும்போது DEET இன் குறைந்த (10-8 M) மற்றும் அதிக (10-5 M) செறிவுகள் எண்டோடெலியல் ACHE செயல்பாட்டைக் குறைத்தன (படம் 2).
DEET இன் இரண்டு செறிவுகளும் (10-8 M மற்றும் 10-5 M) HUVEC இல் அசிடைல்கொலினெஸ்டரேஸ் செயல்பாட்டைக் குறைத்தன. BW284c51 (10-5 M) அசிடைல்கொலினெஸ்டரேஸ் தடுப்பான்களுக்கான கட்டுப்பாட்டாகப் பயன்படுத்தப்பட்டது. வாகனத்தால் சிகிச்சையளிக்கப்பட்ட செல்களுடன் ஒப்பிடும்போது DEET இன் இரண்டு செறிவுகளுடன் சிகிச்சையளிக்கப்பட்ட HUVEC இல் ACHE செயல்பாட்டின் சதவீதமாக முடிவுகள் வெளிப்படுத்தப்படுகின்றன. மதிப்புகள் ஆறு சுயாதீன சோதனைகளின் சராசரி ± SEM ஆக வெளிப்படுத்தப்படுகின்றன. *p < 0.05 கட்டுப்பாட்டுடன் ஒப்பிடும்போது (க்ருஸ்கல்-வாலிஸ் மற்றும் டன் பல ஒப்பீட்டு சோதனை).
நைட்ரிக் ஆக்சைடு (NO) ஆஞ்சியோஜெனிக் செயல்முறையில் ஈடுபட்டுள்ளது 33, எனவே, DEET-தூண்டப்பட்ட HUVEC களில் NO உற்பத்தி ஆய்வு செய்யப்பட்டது. கட்டுப்பாட்டு செல்களுடன் ஒப்பிடும்போது DEET-சிகிச்சையளிக்கப்பட்ட எண்டோடெலியல் NO உற்பத்தி அதிகரித்தது, ஆனால் 10-8 M (படம் 3c) அளவில் மட்டுமே முக்கியத்துவத்தை அடைந்தது. DEET-தூண்டப்பட்ட NO உற்பத்தியைக் கட்டுப்படுத்தும் மூலக்கூறு மாற்றங்களைத் தீர்மானிக்க, eNOS வெளிப்பாடு மற்றும் செயல்படுத்தல் மேற்கத்திய பிளாட்டிங் மூலம் பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டது. DEET சிகிச்சையானது eNOS வெளிப்பாட்டை மாற்றவில்லை என்றாலும், eNOS பாஸ்போரிலேஷனில் சிகிச்சையளிக்கப்படாத செல்களுடன் ஒப்பிடும்போது அதன் தடுப்பு தளத்தை (Thr-495) குறைக்கும் அதே வேளையில் அதன் செயல்படுத்தும் தளத்தில் (Ser-1177) இது கணிசமாக அதிகரித்தது (படம் 3d). மேலும், செயல்படுத்தும் தளம் மற்றும் தடுப்பு தளத்தில் பாஸ்போரிலேட்டட் eNOS இன் விகிதம் பாஸ்போரிலேட்டட் eNOS இன் அளவை நொதியின் மொத்த அளவிற்கு இயல்பாக்கிய பிறகு கணக்கிடப்பட்டது. சிகிச்சையளிக்கப்படாத செல்களுடன் ஒப்பிடும்போது DEET இன் ஒவ்வொரு செறிவுடன் சிகிச்சையளிக்கப்பட்ட HUVEC களில் இந்த விகிதம் கணிசமாக அதிகரித்தது (படம் 3d).
இறுதியாக, முக்கிய புரோஆஞ்சியோஜெனிக் காரணிகளில் ஒன்றான VEGF இன் வெளிப்பாடு, மேற்கத்திய பிளாட்டிங் மூலம் பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டது. DEET VEGF வெளிப்பாட்டை கணிசமாக அதிகரித்தது, அதேசமயம் pFHHSiD இந்த வெளிப்பாட்டை முற்றிலுமாகத் தடுத்தது.
DEET இன் விளைவுகள் மருந்தியல் முற்றுகை மற்றும் M3 ஏற்பிகளைக் குறைத்தல் ஆகிய இரண்டிற்கும் உணர்திறன் கொண்டவை என்பதால், DEET கால்சியம் சமிக்ஞையை மேம்படுத்தக்கூடும் என்ற கருதுகோளை நாங்கள் சோதித்தோம். ஆச்சரியப்படும் விதமாக, பயன்படுத்தப்படும் இரண்டு செறிவுகளுக்கும் HUVEC (தரவு காட்டப்படவில்லை) மற்றும் HEK/M3 (படம் 4a, b) ஆகியவற்றில் சைட்டோபிளாஸ்மிக் கால்சியத்தை அதிகரிக்க DEET தவறிவிட்டது.
இடுகை நேரம்: டிசம்பர்-30-2024