சிறிய நீர்வாழ் தலைப்பிரட்டைகளுக்கு வணிக ரீதியான சைபர்மெத்ரின் தயாரிப்புகளின் இறப்பு மற்றும் நச்சுத்தன்மை

இந்த ஆய்வு வணிக ரீதியானவற்றின் மரண விளைவு, மரண விளைவின்மை மற்றும் நச்சுத்தன்மை ஆகியவற்றை மதிப்பிட்டது.சைபர்மெத்ரின்தவளைக் குஞ்சுகளுக்கு எதிரான மருந்துக் கலவைகள். தீவிர சோதனையில், 100–800 μg/L செறிவுகள் 96 மணி நேரத்திற்குச் சோதிக்கப்பட்டன. நாள்பட்ட சோதனையில், இயற்கையாகக் கிடைக்கும் சைப்பர்மெத்ரின் செறிவுகள் (1, 3, 6, மற்றும் 20 μg/L) இறப்பு விகிதத்திற்காகச் சோதிக்கப்பட்டன, அதைத் தொடர்ந்து 7 நாட்களுக்கு நுண்கரு சோதனை மற்றும் இரத்தச் சிவப்பணுக்களின் உட்கரு அசாதாரணங்கள் சோதிக்கப்பட்டன. தலைப்பிரட்டைகளுக்கு எதிரான வணிக சைப்பர்மெத்ரின் மருந்துக் கலவையின் LC50 மதிப்பு 273.41 μg L−1 ஆக இருந்தது. நாள்பட்ட சோதனையில், மிக உயர்ந்த செறிவு (20 μg L−1) 50%-க்கும் அதிகமான இறப்பு விகிதத்தை ஏற்படுத்தியது, ஏனெனில் அது சோதிக்கப்பட்ட தலைப்பிரட்டைகளில் பாதியைக் கொன்றது. நுண்கரு சோதனையானது 6 மற்றும் 20 μg L−1 செறிவுகளில் குறிப்பிடத்தக்க முடிவுகளைக் காட்டியதுடன், பல உட்கரு அசாதாரணங்களும் கண்டறியப்பட்டன. இது, வணிக சைப்பர்மெத்ரின் மருந்துக் கலவையானது P. gracilis-க்கு எதிராக மரபணு நச்சுத்தன்மையைக் கொண்டுள்ளது என்பதைக் குறிக்கிறது. சைப்பர்மெத்ரின் இந்த இனத்திற்கு அதிக ஆபத்தை விளைவிக்கக்கூடியது. இது குறுகிய மற்றும் நீண்ட காலத்திற்கு பல பிரச்சனைகளை ஏற்படுத்தி, இந்தச் சூழல் மண்டலத்தின் இயக்கவியலைப் பாதிக்கக்கூடும் என்பதைக் குறிக்கிறது. எனவே, வணிக ரீதியான சைப்பர்மெத்ரின் கலவைகள் பி. கிரசிலிஸ் மீது நச்சு விளைவுகளை ஏற்படுத்துகின்றன என்று முடிவு செய்யலாம்.
விவசாய நடவடிக்கைகளின் தொடர்ச்சியான விரிவாக்கம் மற்றும் தீவிர பயன்பாடு காரணமாகபூச்சி கட்டுப்பாடுநடவடிக்கைகள் காரணமாக, நீர்வாழ் விலங்குகள் அடிக்கடி பூச்சிக்கொல்லிகளுக்கு ஆளாகின்றன¹,². விவசாய நிலங்களுக்கு அருகிலுள்ள நீர் வளங்கள் மாசுபடுவது, இருவாழ்விகள் போன்ற இலக்கற்ற உயிரினங்களின் வளர்ச்சி மற்றும் உயிர்வாழ்வைப் பாதிக்கக்கூடும்.
சுற்றுச்சூழல் கூறுகளை மதிப்பிடுவதில் இருவாழ்விகள் பெருகிய முறையில் முக்கியத்துவம் பெற்று வருகின்றன. தவளைகள் அவற்றின் தனித்துவமான பண்புகளான சிக்கலான வாழ்க்கைச் சுழற்சிகள், விரைவான லார்வா வளர்ச்சி விகிதங்கள், உணவு நிலை, ஊடுருவக்கூடிய தோல்¹⁰,¹¹, இனப்பெருக்கத்திற்கு நீரைச் சார்ந்திருத்தல்¹² மற்றும் பாதுகாப்பற்ற முட்டைகள்¹¹,¹³,¹⁴ ஆகியவற்றின் காரணமாக சுற்றுச்சூழல் மாசுபடுத்திகளின் நல்ல உயிரிக்குறியீடுகளாகக் கருதப்படுகின்றன. பொதுவாக அழுகு தவளை என்று அழைக்கப்படும் சிறிய நீர் தவளை (Physalaemus gracilis), பூச்சிக்கொல்லி மாசுபாட்டின் உயிரிக்குறியீட்டு இனமாக இருப்பது நிரூபிக்கப்பட்டுள்ளது⁴,⁵,⁶,⁷,¹⁵. இந்த இனம் அர்ஜென்டினா, உருகுவே, பராகுவே மற்றும் பிரேசில்¹⁶¹⁷ ஆகிய நாடுகளில் தேங்கி நிற்கும் நீர்நிலைகள், பாதுகாக்கப்பட்ட பகுதிகள் அல்லது மாறுபட்ட வாழ்விடங்களைக் கொண்ட பகுதிகளில் காணப்படுகிறது. மேலும், அதன் பரந்த பரவல் மற்றும் வெவ்வேறு வாழ்விடங்களைத் தாங்கும் தன்மை¹⁸ காரணமாக IUCN வகைப்பாட்டின்படி இது நிலையானதாகக் கருதப்படுகிறது.
சைப்பர்மெத்ரின் நச்சுக்கு ஆட்பட்ட பிறகு, நீர்நில வாழ் உயிரினங்களில் உயிருக்கு ஆபத்தற்ற விளைவுகள் பதிவாகியுள்ளன. அவற்றுள் தலைப்பிரட்டைகளில் ஏற்படும் நடத்தை, உருவவியல் மற்றும் உயிர்வேதியியல் மாற்றங்கள்²³,²⁴,²⁵, மாற்றப்பட்ட இறப்பு விகிதம் மற்றும் உருமாற்ற நேரம், நொதி மாற்றங்கள், குஞ்சு பொரிக்கும் வெற்றி விகிதம் குறைதல்²⁴,²⁵, அதீத செயல்பாடு²⁶, கோலினெஸ்டரேஸ் செயல்பாட்டின் தடுப்பு²⁷ மற்றும் நீச்சல் செயல்திறனில் ஏற்படும் மாற்றங்கள்⁷,²⁸ ஆகியவை அடங்கும். இருப்பினும், நீர்நில வாழ் உயிரினங்களில் சைப்பர்மெத்ரினின் மரபணு நச்சு விளைவுகள் குறித்த ஆய்வுகள் குறைவாகவே உள்ளன. எனவே, தவளை இனங்கள் சைப்பர்மெத்ரினுக்கு ஆட்படும் தன்மையை மதிப்பிடுவது அவசியமாகும்.
சுற்றுச்சூழல் மாசுபாடு நீர்நில வாழ் உயிரினங்களின் இயல்பான வளர்ச்சி மற்றும் மேம்பாட்டைப் பாதிக்கிறது, ஆனால் பூச்சிக்கொல்லி வெளிப்பாட்டினால் ஏற்படும் டி.என்.ஏ-வின் மரபணு சேதமே மிகவும் கடுமையான பாதகமான விளைவாகும்¹³. இரத்த அணுக்களின் உருவவியல் பகுப்பாய்வு என்பது மாசுபாடு மற்றும் காட்டு உயிரினங்களுக்கு ஒரு பொருளின் சாத்தியமான நச்சுத்தன்மையைக் கண்டறிவதற்கான ஒரு முக்கியமான உயிரிக்குறியீடாகும்²⁹. சுற்றுச்சூழலில் உள்ள வேதிப்பொருட்களின் மரபணு நச்சுத்தன்மையைக் கண்டறியப் பொதுவாகப் பயன்படுத்தப்படும் முறைகளில் மைக்ரோநியூக்ளியஸ் சோதனையும் ஒன்றாகும்³⁰. இது ஒரு விரைவான, பயனுள்ள மற்றும் மலிவான முறையாகும். இது நீர்நில வாழ் உயிரினங்கள் போன்ற உயிரினங்களில் ஏற்படும் வேதி மாசுபாட்டைக் கண்டறிய ஒரு நல்ல குறியீடாக இருப்பதுடன்³¹,³², மரபணு நச்சு மாசுபடுத்திகளின் வெளிப்பாடு குறித்த தகவல்களையும் வழங்க முடியும்³.
நுண்கரு சோதனை மற்றும் சூழலியல் இடர் மதிப்பீட்டைப் பயன்படுத்தி, சிறிய நீர்வாழ் தலைப்பிரட்டைகளுக்கு வணிக ரீதியான சைபர்மெத்ரின் கலவைகளின் நச்சுத்தன்மையை மதிப்பிடுவதே இந்த ஆய்வின் நோக்கமாகும்.
சோதனையின் தீவிர காலகட்டத்தில், வெவ்வேறு செறிவுகளில் உள்ள வணிக சைபர்மெத்ரினுக்கு உட்படுத்தப்பட்ட பி. கிராசிலிஸ் தலைப்பிரட்டைகளின் ஒட்டுமொத்த இறப்பு விகிதம் (%).
ஒரு நீண்டகால சோதனையின் போது, ​​வெவ்வேறு செறிவுகளில் உள்ள வணிக சைபர்மெத்ரினுக்கு உட்படுத்தப்பட்ட பி. கிராசிலிஸ் தலைப்பிரட்டைகளின் ஒட்டுமொத்த இறப்பு விகிதம் (%).
சைப்பர்மெத்ரினின் வெவ்வேறு செறிவுகளுக்கு (6 மற்றும் 20 μg/L) உட்படுத்தப்பட்ட நீர்நில வாழ் உயிரினங்களில் காணப்பட்ட அதிக இறப்பு விகிதமானது, இரத்தச் சிவப்பணுக்களில் மைக்ரோநியூக்ளியை (MN) மற்றும் உட்கரு அசாதாரணங்கள் இருப்பதன் மூலம் நிரூபிக்கப்பட்டபடி, மரபணு நச்சு விளைவுகளின் விளைவாகும். மைக்ரோநியூக்ளியை உருவாக்கம் மைட்டாசிஸில் ஏற்படும் பிழைகளைக் குறிக்கிறது மற்றும் குரோமோசோம்கள் மைக்ரோடியூபில்களுடன் சரியாகப் பிணைக்கப்படாதது, குரோமோசோம் உட்கொள்ளல் மற்றும் கடத்தலுக்குப் பொறுப்பான புரதக் கூட்டுகளில் உள்ள குறைபாடுகள், குரோமோசோம் பிரித்தலில் ஏற்படும் பிழைகள் மற்றும் டிஎன்ஏ சேதப் பழுதுபார்ப்பில் ஏற்படும் பிழைகள்38,39 ஆகியவற்றுடன் தொடர்புடையது. மேலும் இது பூச்சிக்கொல்லி-தூண்டப்பட்ட ஆக்ஸிஜனேற்ற அழுத்தத்துடன்40,41 தொடர்புடையதாக இருக்கலாம். மதிப்பிடப்பட்ட அனைத்து செறிவுகளிலும் மற்ற அசாதாரணங்கள் காணப்பட்டன. சைப்பர்மெத்ரின் செறிவுகளை அதிகரிப்பது, இரத்தச் சிவப்பணுக்களில் உள்ள உட்கரு அசாதாரணங்களை மிகக் குறைந்த (1 μg/L) மற்றும் மிக அதிக (20 μg/L) அளவுகளில் முறையே 5% மற்றும் 20% அதிகரித்தது. உதாரணமாக, ஒரு சிற்றினத்தின் டி.என்.ஏ-வில் ஏற்படும் மாற்றங்கள், அதன் குறுகிய மற்றும் நீண்ட கால உயிர்வாழ்வில் கடுமையான விளைவுகளை ஏற்படுத்தக்கூடும். இதன் விளைவாக, இனத்தொகை சரிவு, இனப்பெருக்கத் தகுதியில் மாற்றம், நெருங்கிய உறவுகளுக்குள் இனப்பெருக்கம், மரபணுப் பன்முகத்தன்மை இழப்பு மற்றும் இடம்பெயர்வு விகிதங்களில் மாற்றம் போன்றவை ஏற்படலாம். இந்தக் காரணிகள் அனைத்தும் சிற்றினங்களின் உயிர்வாழ்வையும் பராமரிப்பையும் பாதிக்கக்கூடும்42,43. எரித்ராய்டு ஒழுங்கின்மைகளின் உருவாக்கம், சைட்டோகைனிசிஸில் ஒரு தடையைக் குறிக்கலாம். இது அசாதாரண செல் பிரிவுக்கு (இரு உட்கரு கொண்ட எரித்ரோசைட்டுகள்) வழிவகுக்கும்44,45; பல மடல் உட்கருக்கள் என்பவை பல மடல்களைக் கொண்ட உட்கரு சவ்வின் நீட்சிகளாகும்46, அதேசமயம் மற்ற எரித்ராய்டு ஒழுங்கின்மைகள், உட்கரு சிறுநீரகங்கள்/குமிழ்கள் போன்ற டி.என்.ஏ பெருக்கத்துடன் தொடர்புடையதாக இருக்கலாம்47. உட்கரு இல்லாத எரித்ரோசைட்டுகளின் இருப்பு, குறிப்பாக அசுத்தமான நீரில், ஆக்சிஜன் கடத்தலில் ஏற்படும் குறைபாட்டைக் குறிக்கலாம்48,49. அப்போப்டோசிஸ் என்பது செல் இறப்பைக் குறிக்கிறது50.
சைப்பர்மெத்ரினின் மரபணு நச்சு விளைவுகளை மற்ற ஆய்வுகளும் நிரூபித்துள்ளன. கபானா மற்றும் குழுவினர்⁵¹, 96 மணி நேரத்திற்கு அதிக செறிவுள்ள சைப்பர்மெத்ரினுக்கு (5000 மற்றும் 10,000 μg L⁻¹) உட்படுத்தப்பட்ட பிறகு, ஒடோன்டோப்ரைனஸ் அமெரிக்கானஸ் செல்களில் நுண்கருக்கள் மற்றும் இரு உட்கரு செல்கள், அப்போப்டோடிக் செல்கள் போன்ற உட்கரு மாற்றங்கள் இருப்பதைக் காட்டினர். சைப்பர்மெத்ரினால் தூண்டப்பட்ட அப்போப்டோசிஸ், பி. பிலிகோனிஜெரஸ்⁵² மற்றும் ரைனெல்லா அரேனாரம்⁵³ ஆகியவற்றிலும் கண்டறியப்பட்டது. இந்த முடிவுகள், சைப்பர்மெத்ரின் பல்வேறு நீர்வாழ் உயிரினங்களில் மரபணு நச்சு விளைவுகளைக் கொண்டுள்ளது என்பதையும், MN மற்றும் ENA சோதனையானது நீர்நில வாழ் உயிரினங்களில் ஏற்படும் உயிருக்கு ஆபத்தற்ற விளைவுகளுக்கான ஒரு குறிகாட்டியாக இருக்கலாம் என்பதையும், மேலும் இது நச்சுப் பொருட்களுக்கு ஆளாகும் உள்ளூர் இனங்கள் மற்றும் காட்டு உயிரினங்களுக்கும் பொருந்தக்கூடும் என்பதையும் சுட்டிக்காட்டுகின்றன¹².
சைப்பர்மெத்ரினின் வணிக ரீதியான கலவைகள், அமெரிக்க சுற்றுச்சூழல் பாதுகாப்பு முகமையின் (EPA) அளவை விட அதிகமான HQ-க்களைக் கொண்டு, சுற்றுச்சூழலில் இருந்தால் உயிரினங்களைப் பாதகமாகப் பாதிக்கக்கூடிய கடுமையான மற்றும் நாள்பட்ட அதிக சுற்றுச்சூழல் அபாயத்தை ஏற்படுத்துகின்றன. நாள்பட்ட அபாய மதிப்பீட்டில், இறப்புக்கான NOEC 3 μg L−1 ஆக இருந்தது, இது நீரில் காணப்படும் செறிவுகள் உயிரினங்களுக்கு ஆபத்தை ஏற்படுத்தக்கூடும் என்பதை உறுதிப்படுத்துகிறது. எண்டோசல்பான் மற்றும் சைப்பர்மெத்ரின் கலவைக்கு உட்படுத்தப்பட்ட R. arenarum லார்வாக்களுக்கான மரணத்தை விளைவிக்கும் NOEC 168 மணி நேரத்திற்குப் பிறகு 500 μg L−1 ஆக இருந்தது; இந்த மதிப்பு 336 மணி நேரத்திற்குப் பிறகு 0.0005 μg L−1 ஆகக் குறைந்தது. வெளிப்பாட்டின் காலம் அதிகரிக்க அதிகரிக்க, உயிரினங்களுக்கு தீங்கு விளைவிக்கும் செறிவுகள் குறைகின்றன என்பதை ஆய்வாளர்கள் காட்டுகின்றனர். அதே வெளிப்பாட்டு நேரத்தில் P. gracilis-ஐ விட NOEC மதிப்புகள் அதிகமாக இருந்தன என்பதையும் முன்னிலைப்படுத்துவது முக்கியம், இது சைப்பர்மெத்ரினுக்கு உயிரினங்களின் எதிர்வினை அந்தந்த இனத்திற்கே உரியது என்பதைக் குறிக்கிறது. மேலும், இறப்பு விகிதத்தைப் பொறுத்தவரை, சைப்பர்மெத்ரினுக்கு ஆட்பட்ட பிறகு பி. கிராசிலிஸின் CHQ மதிப்பு 64.67-ஐ எட்டியது, இது அமெரிக்க சுற்றுச்சூழல் பாதுகாப்பு முகமையால் நிர்ணயிக்கப்பட்ட குறிப்பு மதிப்பை விட அதிகமாகும்54. மேலும், ஆர். அரேனாரம் லார்வாக்களின் CHQ மதிப்பும் இந்த மதிப்பை விட அதிகமாக இருந்தது (336 மணி நேரத்திற்குப் பிறகு CHQ > 388.00). இது, ஆய்வு செய்யப்பட்ட பூச்சிக்கொல்லிகள் பல நீர்நில வாழ் உயிரினங்களுக்கு அதிக ஆபத்தை விளைவிக்கின்றன என்பதைக் காட்டுகிறது. பி. கிராசிலிஸ் தனது உருமாற்றத்தை நிறைவு செய்ய சுமார் 30 நாட்கள் எடுத்துக்கொள்கிறது56 என்பதைக் கருத்தில் கொண்டால், ஆய்வு செய்யப்பட்ட சைப்பர்மெத்ரின் செறிவுகள், பாதிக்கப்பட்ட உயிரினங்கள் இளம் வயதிலேயே முதிர்நிலை அல்லது இனப்பெருக்க நிலைக்குள் நுழைவதைத் தடுப்பதன் மூலம், அவற்றின் இனத்தொகைக் குறைவுக்குப் பங்களிக்கக்கூடும் என்று முடிவு செய்யலாம்.
நுண் உட்கருக்கள் மற்றும் பிற இரத்தச் சிவப்பணு உட்கரு அசாதாரணங்களின் கணக்கிடப்பட்ட இடர் மதிப்பீட்டில், CHQ மதிப்புகள் 14.92 முதல் 97.00 வரை இருந்தன. இது, சைப்பர்மெத்ரின் அதன் இயற்கையான வாழ்விடத்தில்கூட P. gracilis-க்கு ஒரு சாத்தியமான மரபணு நச்சு அபாயத்தைக் கொண்டிருந்தது என்பதைக் குறிக்கிறது. இறப்பு விகிதத்தைக் கணக்கில் எடுத்துக்கொண்டால், P. gracilis-ஆல் தாங்கிக்கொள்ளக்கூடிய அயல் வேதிச் சேர்மங்களின் அதிகபட்ச செறிவு 4.24 μg L−1 ஆக இருந்தது. இருப்பினும், 1 μg/L போன்ற குறைந்த செறிவுகளும்கூட மரபணு நச்சு விளைவுகளைக் காட்டின. இந்த உண்மை, அசாதாரண உயிரினங்களின் எண்ணிக்கையை அதிகரிக்கச் செய்து, அவற்றின் வாழ்விடங்களில் உள்ள உயிரினங்களின் வளர்ச்சி மற்றும் இனப்பெருக்கத்தைப் பாதிக்கக்கூடும். இது நீர்நில வாழ் உயிரினங்களின் எண்ணிக்கையில் சரிவுக்கு வழிவகுக்கும்.
சைப்பர்மெத்ரின் என்ற பூச்சிக்கொல்லியின் வணிக ரீதியான கலவைகள், பி. கிராசிலிஸ் (P. gracilis) இனத்திற்கு அதிக தீவிர மற்றும் நாள்பட்ட நச்சுத்தன்மையைக் காட்டின. அதிக இறப்பு விகிதங்கள் காணப்பட்டன, இது பெரும்பாலும் நச்சு விளைவுகளால் ஏற்பட்டிருக்கலாம். நுண்ணுக்கருக்கள் மற்றும் இரத்தச் சிவப்பணுக்களின் உட்கருக்களில் காணப்படும் அசாதாரணங்கள், குறிப்பாக ரம்பப்பல் போன்ற உட்கருக்கள், மடல் போன்ற உட்கருக்கள் மற்றும் குமிழி போன்ற உட்கருக்கள் ஆகியவை இதற்குச் சான்றாக விளங்குகின்றன. மேலும், ஆய்வு செய்யப்பட்ட இந்த இனம், தீவிர மற்றும் நாள்பட்ட சுற்றுச்சூழல் அபாயங்கள் அதிகரித்திருப்பதைக் காட்டியது. இந்தத் தரவுகள், எங்கள் ஆய்வுக் குழுவின் முந்தைய ஆய்வுகளுடன் இணைந்து, சைப்பர்மெத்ரினின் வெவ்வேறு வணிக ரீதியான கலவைகள் கூட அசிடைல்கோலினெஸ்டரேஸ் (AChE) மற்றும் பியூட்டைரில்கோலினெஸ்டரேஸ் (BChE) செயல்பாடுகளைக் குறைத்து, ஆக்சிஜனேற்ற அழுத்தத்தையும் ஏற்படுத்துகின்றன58. மேலும், பி. கிராசிலிஸ் இனத்தில் நீச்சல் செயல்பாட்டில் மாற்றங்களையும் வாய்வழி உருக்குலைவுகளையும் ஏற்படுத்துகின்றன59. இது, சைப்பர்மெத்ரினின் வணிக ரீதியான கலவைகள் இந்த இனத்திற்கு அதிக உயிர்க்கொல்லி மற்றும் உயிர்க்கொல்லி அல்லாத நச்சுத்தன்மையைக் கொண்டுள்ளன என்பதைக் குறிக்கிறது. ஹார்ட்மேன் மற்றும் பலர். மற்ற ஒன்பது பூச்சிக்கொல்லிகளுடன் ஒப்பிடும்போது, ​​சைப்பர்மெத்ரினின் வணிக ரீதியான கலவைகள் பி. கிராசிலிஸ் மற்றும் அதே பேரினத்தைச் சேர்ந்த மற்றொரு இனமான பி. குவியேரிக்கு மிகவும் நச்சுத்தன்மை வாய்ந்தவை என்று 60-ஆவது ஆய்வு கண்டறிந்துள்ளது. சுற்றுச்சூழல் பாதுகாப்பிற்காக சட்டப்பூர்வமாக அங்கீகரிக்கப்பட்ட சைப்பர்மெத்ரினின் செறிவுகள் அதிக இறப்பு விகிதத்திற்கும் நீண்டகால இனத்தொகை சரிவுக்கும் வழிவகுக்கக்கூடும் என்பதை இது சுட்டிக்காட்டுகிறது.
சுற்றுச்சூழலில் காணப்படும் செறிவுகள் அதிக இறப்பை ஏற்படுத்தக்கூடும் என்பதாலும், P. gracilis இனத்திற்கு அபாயத்தை விளைவிக்கக்கூடும் என்பதாலும், நீர்நில வாழ் உயிரினங்களுக்கு பூச்சிக்கொல்லியின் நச்சுத்தன்மையை மதிப்பிடுவதற்கு மேலதிக ஆய்வுகள் தேவைப்படுகின்றன. நீர்நில வாழ் உயிரினங்கள், குறிப்பாக பிரேசிலிய இனங்கள் குறித்த தரவுகள் குறைவாக இருப்பதால், அவை தொடர்பான ஆய்வுகள் ஊக்குவிக்கப்பட வேண்டும்.
நாள்பட்ட நச்சுத்தன்மை சோதனையானது, நிலையான சூழலில் 168 மணி நேரம் (7 நாட்கள்) நீடித்தது. மேலும், உயிரிழப்பை ஏற்படுத்தாத செறிவுகள் 1, 3, 6 மற்றும் 20 μg ai L−1 ஆக இருந்தன. இரண்டு சோதனைகளிலும், ஒவ்வொரு சிகிச்சை குழுவிற்கும் 10 தலைப்பிரட்டைகள் வீதம், ஆறு மறுசெய்கைகளுடன் மதிப்பீடு செய்யப்பட்டன; இதன்மூலம் ஒவ்வொரு செறிவுக்கும் மொத்தம் 60 தலைப்பிரட்டைகள் மதிப்பீடு செய்யப்பட்டன. இதற்கிடையில், வெறும் தண்ணீர் மட்டும் கொண்ட சிகிச்சையானது ஒரு எதிர்மறை கட்டுப்பாடாகச் செயல்பட்டது. ஒவ்வொரு சோதனை அமைப்பும், 500 மில்லி கொள்ளளவு மற்றும் 50 மில்லி கரைசலுக்கு 1 தலைப்பிரட்டை என்ற அடர்த்தி கொண்ட ஒரு கிருமியழிக்கப்பட்ட கண்ணாடிக் குடுவையைக் கொண்டிருந்தது. ஆவியாவதைத் தடுப்பதற்காக அந்தக் குடுவை பாலிஎதிலீன் படலத்தால் மூடப்பட்டு, தொடர்ந்து காற்றோட்டம் செய்யப்பட்டது.
0, 96, மற்றும் 168 மணி நேரங்களில் பூச்சிக்கொல்லி செறிவுகளைக் கண்டறிய நீர் வேதியியல் ரீதியாகப் பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டது. சாபின் மற்றும் குழுவினர் 68 மற்றும் மார்டின்ஸ் மற்றும் குழுவினர் 69 ஆகியோரின் கூற்றுப்படி, சாண்டா மரியா கூட்டாட்சிப் பல்கலைக்கழகத்தின் பூச்சிக்கொல்லி பகுப்பாய்வு ஆய்வகத்தில் (LARP), மும்மை குவாட்ரூபோல் நிறை நிறமாலைமானியுடன் இணைக்கப்பட்ட வாயு நிறப்பிரிகை (வேரியன் மாடல் 1200, பாலோ ஆல்டோ, கலிபோர்னியா, அமெரிக்கா) பயன்படுத்தி இந்தப் பகுப்பாய்வுகள் செய்யப்பட்டன. நீரில் உள்ள பூச்சிக்கொல்லிகளின் அளவுசார் நிர்ணயம் துணைப் பொருளாக (அட்டவணை SM1) காட்டப்பட்டுள்ளது.
நுண் உட்கரு சோதனை (MNT) மற்றும் இரத்தச் சிவப்பணு உட்கரு அசாதாரண சோதனை (RNA) ஆகியவற்றுக்காக, ஒவ்வொரு சிகிச்சைக் குழுவிலிருந்தும் 15 தலைப்பிரட்டைகள் பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டன. தலைப்பிரட்டைகளுக்கு 5% லிடோகெய்ன் (50 மி.கி/கி-170) மூலம் மயக்க மருந்து கொடுக்கப்பட்டு, ஒருமுறை பயன்படுத்தக்கூடிய ஹெப்பரினைஸ் செய்யப்பட்ட சிரிஞ்சுகளைப் பயன்படுத்தி இதயத் துளைப்பு மூலம் இரத்த மாதிரிகள் சேகரிக்கப்பட்டன. இரத்தப் பூச்சுகள் கிருமியழிக்கப்பட்ட நுண்ணோக்கி ஸ்லைடுகளில் தயாரிக்கப்பட்டு, காற்றில் உலர்த்தப்பட்டு, 2 நிமிடங்களுக்கு 100% மெத்தனால் (4 °C) கொண்டு நிலைப்படுத்தப்பட்டன. பின்னர், இருட்டில் 15 நிமிடங்களுக்கு 10% கீம்சா கரைசலால் சாயமேற்றப்பட்டன. செயல்முறையின் முடிவில், அதிகப்படியான சாயத்தை அகற்ற ஸ்லைடுகள் காய்ச்சி வடிகட்டிய நீரால் கழுவப்பட்டு, அறை வெப்பநிலையில் உலர்த்தப்பட்டன.
MN மற்றும் ENA இருப்பதைக் கண்டறிய, ஒவ்வொரு தலைப்பிரட்டையிலிருந்தும் குறைந்தது 1000 இரத்தச் சிவப்பணுக்கள், 71 அப்ஜெக்டிவ் கொண்ட 100× நுண்ணோக்கியைப் பயன்படுத்தி பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டன. சைப்பர்மெத்ரின் செறிவுகள் மற்றும் கட்டுப்பாடுகளைக் கருத்தில் கொண்டு, தலைப்பிரட்டைகளிலிருந்து மொத்தம் 75,796 இரத்தச் சிவப்பணுக்கள் மதிப்பீடு செய்யப்பட்டன. கராஸ்கோ மற்றும் ஃபெனெக் ஆகியோரின் முறையின்படி மரபணு நச்சுத்தன்மை பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டது.38,72 பின்வரும் உட்கருப் பாதிப்புகளின் அதிர்வெண்ணைக் கண்டறிவதன் மூலம் இது செய்யப்பட்டது: (1) உட்கருவற்ற செல்கள்: உட்கரு இல்லாத செல்கள்; (2) அப்போப்டோடிக் செல்கள்: உட்கரு சிதைவு, திட்டமிடப்பட்ட செல் இறப்பு; (3) இரு உட்கரு செல்கள்: இரண்டு உட்கருக்களைக் கொண்ட செல்கள்; (4) உட்கரு மொட்டுகள் அல்லது குமிழி செல்கள்: உட்கரு சவ்வின் சிறிய நீட்சிகளைக் கொண்ட உட்கருக்களைக் கொண்ட செல்கள், நுண் உட்கருக்களின் அளவிற்கு ஒத்த குமிழிகள்; (5) உட்கரு சிதைந்த செல்கள்: உட்கருவின் வெளிப்புற வடிவம் மட்டுமே உள்ள, உட்பொருள் இல்லாத செல்கள்; (6) பள்ளம் விழுந்த செல்கள்: அவற்றின் வடிவத்தில் தெளிவான விரிசல்கள் அல்லது பள்ளங்களைக் கொண்ட உட்கருக்களைக் கொண்ட செல்கள், சிறுநீரக வடிவ உட்கருக்கள் என்றும் அழைக்கப்படுகின்றன; (7) மடல்களாலான செல்கள்: மேற்கூறிய வெசிகல்களை விட பெரிய உட்கரு நீட்சிகளைக் கொண்ட செல்கள்; மற்றும் (8) நுண்செல்கள்: சுருங்கிய உட்கருக்கள் மற்றும் குறைக்கப்பட்ட சைட்டோபிளாசம் கொண்ட செல்கள். இந்த மாற்றங்கள் எதிர்மறை கட்டுப்பாட்டு முடிவுகளுடன் ஒப்பிடப்பட்டன.
தீவிர நச்சுத்தன்மை சோதனை முடிவுகள் (LC50) GBasic மென்பொருள் மற்றும் TSK-Trimmed Spearman-Karber முறை74 ஆகியவற்றைப் பயன்படுத்தி பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டன. நாள்பட்ட சோதனைத் தரவுகள், பிழை இயல்புநிலை (Shapiro-Wilks) மற்றும் மாறுபாட்டின் ஒருபடித்தன்மை (Bartlett) ஆகியவற்றிற்காக முன்-சோதனை செய்யப்பட்டன. முடிவுகள் ஒருவழி மாறுபாட்டுப் பகுப்பாய்வு (ANOVA) மூலம் பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டன. தரவுகளைத் தங்களுக்குள் ஒப்பிடுவதற்கு டக்கி சோதனையும், சிகிச்சை குழுவிற்கும் எதிர்மறை கட்டுப்பாட்டுக் குழுவிற்கும் இடையில் தரவுகளை ஒப்பிடுவதற்கு டன்னெட் சோதனையும் பயன்படுத்தப்பட்டன.
LOEC மற்றும் NOEC தரவுகள் டன்னெட் சோதனையைப் பயன்படுத்தி பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டன. புள்ளியியல் சோதனைகள் ஸ்டாட்டிஸ்டிகா 8.0 மென்பொருளை (ஸ்டாட்சாஃப்ட்) பயன்படுத்தி 95% முக்கியத்துவ மட்டத்தில் (p < 0.05) செய்யப்பட்டன.