வணிக ரீதியான சைபர்மெத்ரின் தயாரிப்புகளின் இறப்பு மற்றும் நச்சுத்தன்மை சிறிய நீர்வாழ் டாட்போல்களுக்கு.

இந்த ஆய்வு வணிக ரீதியான பொருட்களின் மரணம், உயிருக்கு ஆபத்தான தன்மை மற்றும் நச்சுத்தன்மையை மதிப்பிட்டது.சைபர்மெத்ரின்அனுரான் டாட்போல்களுக்கான சூத்திரங்கள். கடுமையான சோதனையில், 96 மணிநேரத்திற்கு 100–800 μg/L செறிவுகள் சோதிக்கப்பட்டன. நாள்பட்ட சோதனையில், இயற்கையாக நிகழும் சைபர்மெத்ரின் செறிவுகள் (1, 3, 6, மற்றும் 20 μg/L) இறப்புக்காக சோதிக்கப்பட்டன, அதைத் தொடர்ந்து 7 நாட்களுக்கு மைக்ரோநியூக்ளியஸ் சோதனை மற்றும் சிவப்பு இரத்த அணு அணு அசாதாரணங்கள். டாட்போல்களுக்கான வணிக சைபர்மெத்ரின் சூத்திரத்தின் LC50 273.41 μg L−1 ஆகும். நாள்பட்ட சோதனையில், அதிகபட்ச செறிவு (20 μg L−1) 50% க்கும் அதிகமான இறப்புக்கு வழிவகுத்தது, ஏனெனில் இது சோதனை செய்யப்பட்ட டாட்போல்களில் பாதியைக் கொன்றது. மைக்ரோநியூக்ளியஸ் சோதனை 6 மற்றும் 20 μg L−1 இல் குறிப்பிடத்தக்க முடிவுகளைக் காட்டியது மற்றும் பல அணு அசாதாரணங்கள் கண்டறியப்பட்டன, இது வணிக சைபர்மெத்ரின் சூத்திரம் P. கிராசிலிஸுக்கு எதிராக மரபணு நச்சுத்தன்மையைக் கொண்டுள்ளது என்பதைக் குறிக்கிறது. இந்த இனத்திற்கு சைபர்மெத்ரின் அதிக ஆபத்தை ஏற்படுத்துகிறது, இது குறுகிய மற்றும் நீண்ட காலத்திற்கு இந்த சுற்றுச்சூழல் அமைப்பின் இயக்கவியலைப் பாதிக்கும் மற்றும் பல சிக்கல்களை ஏற்படுத்தும் என்பதைக் குறிக்கிறது. எனவே, வணிக சைபர்மெத்ரின் சூத்திரங்கள் பி. கிராசிலிஸில் நச்சு விளைவுகளை ஏற்படுத்துகின்றன என்று முடிவு செய்யலாம்.
விவசாய நடவடிக்கைகளின் தொடர்ச்சியான விரிவாக்கம் மற்றும் தீவிரமான பயன்பாடு காரணமாகபூச்சி கட்டுப்பாடுநீர்வாழ் விலங்குகள் அடிக்கடி பூச்சிக்கொல்லிகளுக்கு ஆளாகின்றன1,2. விவசாய வயல்களுக்கு அருகிலுள்ள நீர்வளங்களை மாசுபடுத்துவது நீர்வீழ்ச்சிகள் போன்ற இலக்கு அல்லாத உயிரினங்களின் வளர்ச்சி மற்றும் உயிர்வாழ்வைப் பாதிக்கலாம்.
சுற்றுச்சூழல் அணிகளின் மதிப்பீட்டில் நீர்நில வாழ்வன அதிக முக்கியத்துவம் பெறுகின்றன. சிக்கலான வாழ்க்கைச் சுழற்சிகள், விரைவான லார்வா வளர்ச்சி விகிதங்கள், டிராபிக் நிலை, ஊடுருவக்கூடிய தோல்10,11, இனப்பெருக்கத்திற்கு தண்ணீரைச் சார்ந்திருத்தல்12 மற்றும் பாதுகாப்பற்ற முட்டைகள்11,13,14 போன்ற தனித்துவமான பண்புகள் காரணமாக அனுரான்கள் சுற்றுச்சூழல் மாசுபடுத்திகளின் நல்ல உயிரியல் குறிகாட்டிகளாகக் கருதப்படுகின்றன. பொதுவாக அழுகை தவளை என்று அழைக்கப்படும் சிறிய நீர் தவளை (பிசலேமஸ் கிராசிலிஸ்), பூச்சிக்கொல்லி மாசுபாட்டின் உயிரியல் குறிகாட்டி இனமாகக் காட்டப்பட்டுள்ளது4,5,6,7,15. இந்த இனம் அர்ஜென்டினா, உருகுவே, பராகுவே மற்றும் பிரேசிலில் தேங்கி நிற்கும் நீர்நிலைகள், பாதுகாக்கப்பட்ட பகுதிகள் அல்லது மாறுபட்ட வாழ்விடங்களைக் கொண்ட பகுதிகளில் காணப்படுகிறது1617 மேலும் பல்வேறு வாழ்விடங்களின் பரவலான விநியோகம் மற்றும் சகிப்புத்தன்மை காரணமாக IUCN வகைப்பாட்டால் நிலையானதாகக் கருதப்படுகிறது18.
சைபர்மெத்ரினுக்கு வெளிப்பட்டதைத் தொடர்ந்து நீர்நில வாழ்வனவற்றில் உயிருக்கு ஆபத்தான விளைவுகள் பதிவாகியுள்ளன, இதில் டாட்போல்களில் நடத்தை, உருவவியல் மற்றும் உயிர்வேதியியல் மாற்றங்கள்23,24,25, இறப்பு மற்றும் உருமாற்ற நேரம் மாற்றம், நொதி மாற்றங்கள், குஞ்சு பொரிக்கும் வெற்றி குறைதல்24,25, அதிவேகத்தன்மை26, கோலினெஸ்டரேஸ் செயல்பாட்டைத் தடுப்பது27 மற்றும் நீச்சல் செயல்திறனில் ஏற்படும் மாற்றங்கள்7,28 ஆகியவை அடங்கும். இருப்பினும், நீர்நில வாழ்வனவற்றில் சைபர்மெத்ரினின் மரபணு நச்சு விளைவுகள் பற்றிய ஆய்வுகள் குறைவாகவே உள்ளன. எனவே, அனுரான் இனங்கள் சைபர்மெத்ரினுக்கு உணர்திறனை மதிப்பிடுவது முக்கியம்.
சுற்றுச்சூழல் மாசுபாடு நீர்நில வாழ்வனவின் இயல்பான வளர்ச்சி மற்றும் வளர்ச்சியை பாதிக்கிறது, ஆனால் பூச்சிக்கொல்லி வெளிப்பாட்டினால் டிஎன்ஏவுக்கு ஏற்படும் மரபணு சேதம் மிகவும் கடுமையான பாதகமான விளைவு ஆகும். இரத்த அணு உருவவியல் பகுப்பாய்வு என்பது மாசுபாடு மற்றும் காட்டு இனங்களுக்கு ஒரு பொருளின் சாத்தியமான நச்சுத்தன்மையின் ஒரு முக்கியமான உயிரியல் குறிகாட்டியாகும்29. சுற்றுச்சூழலில் உள்ள ரசாயனங்களின் மரபணு நச்சுத்தன்மையை தீர்மானிக்க மைக்ரோநியூக்ளியஸ் சோதனை மிகவும் பொதுவாகப் பயன்படுத்தப்படும் முறைகளில் ஒன்றாகும்30. இது ஒரு விரைவான, பயனுள்ள மற்றும் மலிவான முறையாகும், இது நீர்நில வாழ்வன போன்ற உயிரினங்களின் வேதியியல் மாசுபாட்டின் நல்ல குறிகாட்டியாகும்31,32 மற்றும் மரபணு நச்சு மாசுபாடுகளுக்கு வெளிப்பாடு பற்றிய தகவல்களை வழங்க முடியும்33.
இந்த ஆய்வின் நோக்கம், வணிக ரீதியான சைபர்மெத்ரின் சூத்திரங்களின் நச்சுத் திறனை சிறிய நீர்வாழ் டாட்போல்களுக்கு மைக்ரோநியூக்ளியஸ் சோதனை மற்றும் சுற்றுச்சூழல் ஆபத்து மதிப்பீட்டைப் பயன்படுத்தி மதிப்பிடுவதாகும்.
சோதனையின் கடுமையான காலகட்டத்தில் வணிக சைபர்மெத்ரின் வெவ்வேறு செறிவுகளுக்கு வெளிப்படும் பி. கிராசிலிஸ் டாட்போல்களின் ஒட்டுமொத்த இறப்பு (%).
நாள்பட்ட பரிசோதனையின் போது வணிக சைபர்மெத்ரின் வெவ்வேறு செறிவுகளுக்கு வெளிப்படும் பி. கிராசிலிஸ் டாட்போல்களின் ஒட்டுமொத்த இறப்பு (%).
சைபர்மெத்ரின் (6 மற்றும் 20 μg/L) வெவ்வேறு செறிவுகளுக்கு ஆளாகும் நீர்நில வாழ்வனவற்றில் மரபணு நச்சு விளைவுகளின் விளைவாக அதிக இறப்பு ஏற்பட்டுள்ளது, இது நுண் அணுக்கள் (MN) மற்றும் எரித்ரோசைட்டுகளில் அணு அசாதாரணங்கள் இருப்பதன் மூலம் நிரூபிக்கப்பட்டுள்ளது. MN உருவாவது மைட்டோசிஸில் உள்ள பிழைகளைக் குறிக்கிறது மற்றும் குரோமோசோம்களை நுண்குழாய்களுடன் மோசமாக பிணைப்பது, குரோமோசோம் உறிஞ்சுதல் மற்றும் போக்குவரத்திற்கு காரணமான புரத வளாகங்களில் உள்ள குறைபாடுகள், குரோமோசோம் பிரிப்பில் உள்ள பிழைகள் மற்றும் DNA சேதத்தை சரிசெய்வதில் உள்ள பிழைகள்38,39 மற்றும் பூச்சிக்கொல்லியால் தூண்டப்பட்ட ஆக்ஸிஜனேற்ற அழுத்தத்துடன் தொடர்புடையதாக இருக்கலாம்40,41. மதிப்பிடப்பட்ட அனைத்து செறிவுகளிலும் பிற அசாதாரணங்கள் காணப்பட்டன. சைபர்மெத்ரின் செறிவு அதிகரிப்பது எரித்ரோசைட்டுகளில் அணு அசாதாரணங்களை முறையே 5% மற்றும் 20% குறைந்த (1 μg/L) மற்றும் அதிகபட்ச (20 μg/L) அளவுகளில் அதிகரித்தது. எடுத்துக்காட்டாக, ஒரு இனத்தின் DNA இல் ஏற்படும் மாற்றங்கள் குறுகிய மற்றும் நீண்ட கால உயிர்வாழ்விற்கு கடுமையான விளைவுகளை ஏற்படுத்தும், இதன் விளைவாக மக்கள் தொகை சரிவு, இனப்பெருக்கத் திறன் மாற்றம், இனவிருத்தி, மரபணு பன்முகத்தன்மை இழப்பு மற்றும் இடம்பெயர்வு விகிதங்கள் மாற்றம் ஆகியவை ஏற்படும். இந்த காரணிகள் அனைத்தும் உயிரினங்களின் உயிர்வாழ்வையும் பராமரிப்பையும் பாதிக்கலாம்42,43. எரித்ராய்டு அசாதாரணங்களின் உருவாக்கம் சைட்டோகினேசிஸில் ஒரு தடையைக் குறிக்கலாம், இதன் விளைவாக அசாதாரண செல் பிரிவு (பைன் நியூக்ளியேட்டட் எரித்ரோசைட்டுகள்)44,45; பல லோப் கருக்கள் பல லோப்களுடன் அணு சவ்வின் நீட்டிப்புகள் ஆகும்46, அதே நேரத்தில் பிற எரித்ராய்டு அசாதாரணங்கள் அணு சிறுநீரகங்கள்/பிளெப்கள்47 போன்ற டிஎன்ஏ பெருக்கத்துடன் தொடர்புடையதாக இருக்கலாம். அணுக்கரு எரித்ரோசைட்டுகளின் இருப்பு ஆக்ஸிஜன் போக்குவரத்தை பலவீனப்படுத்துவதைக் குறிக்கலாம், குறிப்பாக மாசுபட்ட நீரில்48,49. அப்போப்டோசிஸ் செல் இறப்பைக் குறிக்கிறது50.
சைபர்மெத்ரினின் மரபணு நச்சு விளைவுகளையும் மற்ற ஆய்வுகள் நிரூபித்துள்ளன. கபானா மற்றும் பலர்.51, 96 மணிநேரத்திற்கு அதிக செறிவுள்ள சைபர்மெத்ரின் (5000 மற்றும் 10,000 μg L−1) வெளிப்பட்ட பிறகு, ஓடோன்டோஃப்ரினஸ் அமெரிக்கானஸ் செல்களில் பைனூக்ளியேட்டட் செல்கள் மற்றும் அப்போப்டோடிக் செல்கள் போன்ற நுண்ணிய அணுக்கள் மற்றும் அணு மாற்றங்கள் இருப்பதை நிரூபித்தனர். P. biligonigerus52 மற்றும் Rhinella arenarum53 ஆகியவற்றிலும் சைபர்மெத்ரின் தூண்டப்பட்ட அப்போப்டோசிஸ் கண்டறியப்பட்டது. இந்த முடிவுகள், சைபர்மெத்ரின் பல்வேறு நீர்வாழ் உயிரினங்களில் மரபணு நச்சு விளைவுகளைக் கொண்டுள்ளது என்றும், MN மற்றும் ENA மதிப்பீடு நீர்வீழ்ச்சிகள் மீதான துணை மரண விளைவுகளைக் குறிக்கலாம் என்றும், நச்சுப் பொருட்களுக்கு வெளிப்படும் பூர்வீக இனங்கள் மற்றும் காட்டு மக்களுக்குப் பொருந்தக்கூடும் என்றும் கூறுகின்றன.
சைபர்மெத்ரினின் வணிக சூத்திரங்கள் அதிக சுற்றுச்சூழல் ஆபத்தை ஏற்படுத்துகின்றன (கடுமையான மற்றும் நாள்பட்ட இரண்டும்), HQகள் அமெரிக்க சுற்றுச்சூழல் பாதுகாப்பு நிறுவனத்தின் (EPA) அளவை விட அதிகமாக உள்ளன54, அவை சுற்றுச்சூழலில் இருந்தால் இனங்களை மோசமாக பாதிக்கலாம். நாள்பட்ட ஆபத்து மதிப்பீட்டில், இறப்புக்கான NOEC 3 μg L−1 ஆக இருந்தது, இது தண்ணீரில் காணப்படும் செறிவுகள் இனங்களுக்கு ஆபத்தை ஏற்படுத்தக்கூடும் என்பதை உறுதிப்படுத்துகிறது55. எண்டோசல்பான் மற்றும் சைபர்மெத்ரின் கலவையில் வெளிப்படும் R. அரினாரம் லார்வாக்களுக்கான ஆபத்தான NOEC 168 மணிநேரத்திற்குப் பிறகு 500 μg L−1 ஆக இருந்தது; இந்த மதிப்பு 336 மணிநேரத்திற்குப் பிறகு 0.0005 μg L−1 ஆகக் குறைந்தது. வெளிப்பாடு நீண்டதாக இருந்தால், இனங்களுக்கு தீங்கு விளைவிக்கும் செறிவுகள் குறைவாக இருக்கும் என்று ஆசிரியர்கள் காட்டுகிறார்கள். அதே வெளிப்பாடு நேரத்தில் P. கிராசிலிஸை விட NOEC மதிப்புகள் அதிகமாக இருந்தன என்பதையும் முன்னிலைப்படுத்துவது முக்கியம், இது சைபர்மெத்ரினுக்கு இனங்கள் பதிலளிக்கும் தன்மை இனங்கள் சார்ந்தது என்பதைக் குறிக்கிறது. மேலும், இறப்பு விகிதத்தைப் பொறுத்தவரை, சைபர்மெத்ரினுக்கு வெளிப்பட்ட பிறகு P. கிராசிலிஸின் CHQ மதிப்பு 64.67 ஐ எட்டியது, இது அமெரிக்க சுற்றுச்சூழல் பாதுகாப்பு நிறுவனம் நிர்ணயித்த குறிப்பு மதிப்பை விட அதிகமாகும்54, மேலும் R. அரேனரம் லார்வாக்களின் CHQ மதிப்பும் இந்த மதிப்பை விட அதிகமாக இருந்தது (CHQ > 336 மணிநேரத்திற்குப் பிறகு 388.00), இது ஆய்வு செய்யப்பட்ட பூச்சிக்கொல்லிகள் பல நீர்வீழ்ச்சி இனங்களுக்கு அதிக ஆபத்தை ஏற்படுத்துகின்றன என்பதைக் குறிக்கிறது. P. கிராசிலிஸ் உருமாற்றத்தை முடிக்க தோராயமாக 30 நாட்கள் தேவை என்பதைக் கருத்தில் கொண்டு, சைபர்மெத்ரினின் ஆய்வு செய்யப்பட்ட செறிவுகள் பாதிக்கப்பட்ட நபர்கள் சிறு வயதிலேயே வயதுவந்தோர் அல்லது இனப்பெருக்க நிலைக்கு நுழைவதைத் தடுப்பதன் மூலம் மக்கள் தொகை குறைவதற்கு பங்களிக்கக்கூடும் என்று முடிவு செய்யலாம்.
நுண் அணுக்கள் மற்றும் பிற எரித்ரோசைட் அணு அசாதாரணங்களின் கணக்கிடப்பட்ட ஆபத்து மதிப்பீட்டில், CHQ மதிப்புகள் 14.92 முதல் 97.00 வரை இருந்தன, இது சைபர்மெத்ரின் அதன் இயற்கையான வாழ்விடத்திலும் P. கிராசிலிஸுக்கு சாத்தியமான மரபணு நச்சுத்தன்மையைக் கொண்டிருப்பதைக் குறிக்கிறது. இறப்பைக் கணக்கில் எடுத்துக்கொண்டால், P. கிராசிலிஸுக்கு தாங்கக்கூடிய xenobiotic சேர்மங்களின் அதிகபட்ச செறிவு 4.24 μg L−1 ஆகும். இருப்பினும், 1 μg/L வரையிலான செறிவுகளும் மரபணு நச்சு விளைவுகளைக் காட்டின. இந்த உண்மை அசாதாரண நபர்களின் எண்ணிக்கையில் அதிகரிப்புக்கு வழிவகுக்கும்57 மற்றும் அவற்றின் வாழ்விடங்களில் உயிரினங்களின் வளர்ச்சி மற்றும் இனப்பெருக்கத்தை பாதிக்கலாம், இதனால் நீர்வீழ்ச்சி மக்கள் தொகை குறைகிறது.
பூச்சிக்கொல்லியான சைபர்மெத்ரினின் வணிக சூத்திரங்கள் P. கிராசிலிஸுக்கு அதிக கடுமையான மற்றும் நாள்பட்ட நச்சுத்தன்மையைக் காட்டின. நச்சு விளைவுகள் காரணமாக அதிக இறப்பு விகிதங்கள் காணப்பட்டன, இது நுண்ணுயிரிகள் மற்றும் எரித்ரோசைட் அணு அசாதாரணங்கள், குறிப்பாக செரேட்டட் கருக்கள், லோப்ட் கருக்கள் மற்றும் வெசிகுலர் கருக்கள் இருப்பதன் மூலம் நிரூபிக்கப்பட்டுள்ளது. கூடுதலாக, ஆய்வு செய்யப்பட்ட இனங்கள் கடுமையான மற்றும் நாள்பட்ட சுற்றுச்சூழல் அபாயங்களை அதிகரித்தன. எங்கள் ஆராய்ச்சி குழுவின் முந்தைய ஆய்வுகளுடன் இணைந்து, சைபர்மெத்ரினின் வெவ்வேறு வணிக சூத்திரங்கள் கூட இன்னும் அசிடைல்கொலினெஸ்டரேஸ் (AChE) மற்றும் பியூட்டிரில்கொலினெஸ்டரேஸ் (BChE) செயல்பாடுகள் மற்றும் ஆக்ஸிஜனேற்ற அழுத்தத்தைக் குறைப்பதைக் காட்டியது, மேலும் P. கிராசிலிஸில் நீச்சல் செயல்பாடு மற்றும் வாய்வழி குறைபாடுகளில் மாற்றங்களை ஏற்படுத்தியது, இது சைபர்மெத்ரினின் வணிக சூத்திரங்கள் இந்த இனத்திற்கு அதிக ஆபத்தான மற்றும் சப்லெட்டல் நச்சுத்தன்மையைக் கொண்டிருப்பதைக் குறிக்கிறது. ஹார்ட்மேன் மற்றும் பலர். 60 பேர், சைபர்மெத்ரினின் வணிக சூத்திரங்கள், ஒன்பது பூச்சிக்கொல்லிகளுடன் ஒப்பிடும்போது, ​​பி. கிராசிலிஸ் மற்றும் அதே இனத்தைச் சேர்ந்த மற்றொரு இனத்திற்கு (பி. குவியேரி) மிகவும் நச்சுத்தன்மை வாய்ந்தவை என்பதைக் கண்டறிந்தனர். சுற்றுச்சூழல் பாதுகாப்பிற்காக சட்டப்பூர்வமாக அங்கீகரிக்கப்பட்ட சைபர்மெத்ரின் செறிவுகள் அதிக இறப்பு மற்றும் நீண்டகால மக்கள்தொகை சரிவை ஏற்படுத்தக்கூடும் என்பதை இது குறிக்கிறது.
சுற்றுச்சூழலில் காணப்படும் செறிவுகள் அதிக இறப்பை ஏற்படுத்தக்கூடும் மற்றும் P. கிராசிலிஸுக்கு ஆபத்தை ஏற்படுத்தக்கூடும் என்பதால், நீர்வீழ்ச்சிகளுக்கு பூச்சிக்கொல்லியின் நச்சுத்தன்மையை மதிப்பிடுவதற்கு மேலும் ஆய்வுகள் தேவை. நீர்வீழ்ச்சி இனங்கள் குறித்த ஆராய்ச்சி ஊக்குவிக்கப்பட வேண்டும், ஏனெனில் இந்த உயிரினங்கள் பற்றிய தரவுகள் குறைவாகவே உள்ளன, குறிப்பாக பிரேசிலிய இனங்கள் குறித்து.
நிலையான நிலைமைகளின் கீழ் நாள்பட்ட நச்சுத்தன்மை சோதனை 168 மணிநேரம் (7 நாட்கள்) நீடித்தது மற்றும் உயிருக்கு ஆபத்தான செறிவுகள்: 1, 3, 6 மற்றும் 20 μg ai L−1. இரண்டு சோதனைகளிலும், சிகிச்சை குழுவிற்கு 10 டாட்போல்கள் ஆறு பிரதிகளுடன் மதிப்பீடு செய்யப்பட்டன, மொத்தம் ஒரு செறிவுக்கு 60 டாட்போல்கள். இதற்கிடையில், நீர்-மட்டும் சிகிச்சை எதிர்மறை கட்டுப்பாட்டாக செயல்பட்டது. ஒவ்வொரு சோதனை அமைப்பும் 500 மில்லி கொள்ளளவு மற்றும் 50 மில்லி கரைசலுக்கு 1 டாட்போல் அடர்த்தி கொண்ட ஒரு மலட்டு கண்ணாடி பாத்திரத்தைக் கொண்டிருந்தது. ஆவியாவதைத் தடுக்க பிளாஸ்க் பாலிஎதிலீன் படலத்தால் மூடப்பட்டிருந்தது மற்றும் தொடர்ந்து காற்றோட்டப்படுத்தப்பட்டது.
0, 96 மற்றும் 168 மணிநேரங்களில் பூச்சிக்கொல்லி செறிவுகளைக் கண்டறிய நீர் வேதியியல் ரீதியாக பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டது. சபின் மற்றும் பலர் 68 மற்றும் மார்டின்ஸ் மற்றும் பலர் 69 இன் படி, சாண்டா மரியாவின் பெடரல் பல்கலைக்கழகத்தின் பூச்சிக்கொல்லி பகுப்பாய்வு ஆய்வகத்தில் (LARP) டிரிபிள் குவாட்ரூபோல் மாஸ் ஸ்பெக்ட்ரோமெட்ரியுடன் இணைக்கப்பட்ட வாயு குரோமடோகிராஃபியைப் பயன்படுத்தி பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டது (வேரியன் மாதிரி 1200, பாலோ ஆல்டோ, கலிபோர்னியா, அமெரிக்கா). நீரில் பூச்சிக்கொல்லிகளின் அளவு நிர்ணயம் துணைப் பொருளாகக் காட்டப்பட்டுள்ளது (அட்டவணை SM1).
நுண் கரு சோதனை (MNT) மற்றும் சிவப்பு செல் அணு அசாதாரண சோதனை (RNA) ஆகியவற்றிற்கு, ஒவ்வொரு சிகிச்சை குழுவிலிருந்தும் 15 டாட்போல்கள் பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டன. டாட்போல்கள் 5% லிடோகைன் (50 மி.கி கிராம்-170) மூலம் மயக்க மருந்து செய்யப்பட்டன, மேலும் இரத்த மாதிரிகள் டிஸ்போசபிள் ஹெப்பரினைஸ் செய்யப்பட்ட சிரிஞ்ச்களைப் பயன்படுத்தி இதய துளை மூலம் சேகரிக்கப்பட்டன. இரத்த ஸ்மியர்ஸ் மலட்டு நுண்ணோக்கி ஸ்லைடுகளில் தயாரிக்கப்பட்டு, காற்றில் உலர்த்தப்பட்டு, 100% மெத்தனால் (4 °C) உடன் 2 நிமிடங்களுக்கு சரி செய்யப்பட்டு, பின்னர் 10% ஜீம்சா கரைசலில் 15 நிமிடங்களுக்கு இருட்டில் காய்ச்சி எடுக்கப்பட்டது. செயல்முறையின் முடிவில், அதிகப்படியான கறையை நீக்க ஸ்லைடுகள் காய்ச்சி வடிகட்டிய நீரில் கழுவப்பட்டு அறை வெப்பநிலையில் உலர்த்தப்பட்டன.
ஒவ்வொரு டாட்போலிலிருந்தும் குறைந்தது 1000 RBCகள், MN மற்றும் ENA இருப்பதை தீர்மானிக்க 71 நோக்கத்துடன் 100× நுண்ணோக்கியைப் பயன்படுத்தி பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டன. சைபர்மெத்ரின் செறிவுகள் மற்றும் கட்டுப்பாடுகளைக் கருத்தில் கொண்டு டாட்போல்களிலிருந்து மொத்தம் 75,796 RBCகள் மதிப்பீடு செய்யப்பட்டன. பின்வரும் அணுக்கரு புண்களின் அதிர்வெண்ணை தீர்மானிப்பதன் மூலம் கராஸ்கோ மற்றும் பலர் மற்றும் ஃபெனெக் மற்றும் பலர் 38,72 முறையின்படி ஜெனோடாக்ஸிசிட்டி பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டது: (1) அணுக்கரு செல்கள்: கருக்கள் இல்லாத செல்கள்; (2) அப்போப்டொடிக் செல்கள்: அணுக்கரு துண்டு துண்டாக வெட்டுதல், திட்டமிடப்பட்ட செல் இறப்பு; (3) பைனூக்ளியேட் செல்கள்: இரண்டு கருக்கள் கொண்ட செல்கள்; (4) அணுக்கரு மொட்டுகள் அல்லது பிளெப் செல்கள்: அணுக்கரு சவ்வின் சிறிய நீட்டிப்புகளைக் கொண்ட கருக்கள் கொண்ட செல்கள், நுண்ணுயிரிகளைப் போன்ற அளவில் பிளெப்கள்; (5) காரியோலைஸ் செய்யப்பட்ட செல்கள்: உள் பொருள் இல்லாமல் கருவின் வெளிப்புறத்தை மட்டுமே கொண்ட செல்கள்; (6) நோட்ச் செய்யப்பட்ட செல்கள்: அவற்றின் வடிவத்தில் வெளிப்படையான விரிசல்கள் அல்லது பிளெப்கள் கொண்ட கருக்கள் கொண்ட செல்கள், சிறுநீரக வடிவ கருக்கள் என்றும் அழைக்கப்படுகின்றன; (7) லோபுலேட்டட் செல்கள்: மேற்கூறிய வெசிகிள்களை விட பெரிய அணுக்கரு நீட்டிப்புகளைக் கொண்ட செல்கள்; மற்றும் (8) மைக்ரோசெல்கள்: அமுக்கப்பட்ட கருக்கள் மற்றும் குறைக்கப்பட்ட சைட்டோபிளாசம் கொண்ட செல்கள். மாற்றங்கள் எதிர்மறை கட்டுப்பாட்டு முடிவுகளுடன் ஒப்பிடப்பட்டன.
கடுமையான நச்சுத்தன்மை சோதனை முடிவுகள் (LC50) GBasic மென்பொருள் மற்றும் TSK-Trimmed Spearman-Karber முறையைப் பயன்படுத்தி பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டன74. நாள்பட்ட சோதனைத் தரவு பிழை இயல்புநிலை (Shapiro-Wilks) மற்றும் மாறுபாட்டின் ஒருமைப்பாடு (Bartlett) ஆகியவற்றிற்கு முன்கூட்டியே சோதிக்கப்பட்டது. முடிவுகள் மாறுபாட்டின் ஒரு வழி பகுப்பாய்வு (ANOVA) ஐப் பயன்படுத்தி பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டன. தங்களுக்குள் தரவை ஒப்பிட்டுப் பார்க்க டுகேயின் சோதனை பயன்படுத்தப்பட்டது, மேலும் சிகிச்சை குழுவிற்கும் எதிர்மறை கட்டுப்பாட்டு குழுவிற்கும் இடையிலான தரவை ஒப்பிட்டுப் பார்க்க டன்னட்டின் சோதனை பயன்படுத்தப்பட்டது.
LOEC மற்றும் NOEC தரவுகள் டன்னெட்டின் சோதனையைப் பயன்படுத்தி பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டன. புள்ளிவிவர சோதனைகள் 95% (p < 0.05) முக்கியத்துவ நிலையுடன் Statistica 8.0 மென்பொருளை (StatSoft) பயன்படுத்தி செய்யப்பட்டன.