MAMP-எலிசிட்டட் தற்காப்பு பதிலின் வலிமை மற்றும் சோளத்தில் இலை புள்ளியை இலக்காகக் கொள்ள எதிர்ப்பு

தாவர மற்றும் நோய்க்கிருமி பொருட்கள்

சோர்கம் அசோசியேஷன் மேப்பிங் மக்கள்தொகை சோர்ஹம் கன்வெர்ஷன் பாபுபுல்ஷன் (SCP) என அறியப்படுகிறது, இது இல்லினாய்ஸ் பல்கலைக்கழகத்தில் (இப்போது UC டேவிஸில் உள்ளது) டாக்டர். பாட் பிரவுனால் வழங்கப்பட்டது.இது முன்னர் விவரிக்கப்பட்டது மற்றும் அமெரிக்க சூழலில் தாவரங்களின் வளர்ச்சி மற்றும் வளர்ச்சியை எளிதாக்குவதற்கு ஒளிச்சேர்க்கை-உணர்வின்மை மற்றும் சிறிய உயரத்திற்கு மாற்றப்பட்ட பல்வேறு கோடுகளின் தொகுப்பாகும்.இந்த மக்கள்தொகையில் இருந்து 510 வரிகள் இந்த ஆய்வில் பயன்படுத்தப்பட்டன, இருப்பினும் மோசமான முளைப்பு மற்றும் பிற தரக் கட்டுப்பாடு சிக்கல்கள் காரணமாக, மூன்று பண்புகளின் பகுப்பாய்வில் அனைத்து வரிகளும் பயன்படுத்தப்படவில்லை.இறுதியில் 345 வரிகளிலிருந்து தரவுகள் சிடின் மறுமொழியின் பகுப்பாய்விற்கும், 472 வரிகள் flg22 பதிலுக்கும், 456 TLS எதிர்ப்பிற்கும் பயன்படுத்தப்பட்டன.பி. குக்கீஆர்கன்சாஸ் பல்கலைக்கழகத்தில் டாக்டர். பர்ட் ப்ளூமிடம் இருந்து LSLP18 திரிபு பெறப்பட்டது.

MAMP பதில் அளவீடு

இந்த ஆய்வில் இரண்டு வெவ்வேறு MAMPகள் பயன்படுத்தப்பட்டன flg22, (Genscript catalog# RP19986), மற்றும் chitin .கிரீன்ஹவுஸில் மண் நிரப்பப்பட்ட அடுக்குகளில் (33% சன்ஷைன் ரெடி-எர்த் ப்ரோ க்ரோயிங் மிக்ஸ்) செருகிகளில் சோளம் செடிகள் வளர்க்கப்பட்டன.சேகரிப்பு நாளில் கூடுதல் இலை ஈரப்பதத்தைத் தவிர்ப்பதற்காக மாதிரி சேகரிப்புக்கு முந்தைய நாள் தாவரங்களுக்கு தண்ணீர் பாய்ச்சப்பட்டது.

கோடுகள் சீரற்றதாக மாற்றப்பட்டு, தளவாட காரணங்களுக்காக, 60 கோடுகள் கொண்ட தொகுதிகளில் நடப்பட்டன.ஒவ்வொரு வரிக்கும், ஒரு வரிக்கு இரண்டு விதைகள் என மூன்று 'பானை'கள் நடப்பட்டன.முழு மக்கள்தொகை மதிப்பீடு செய்யப்படும் வரை முந்தைய தொகுதி செயலாக்கப்பட்டவுடன் அடுத்தடுத்த தொகுதிகள் நடப்பட்டன.இரண்டு ரன்களிலும் மறு சீரற்ற மரபணு வகைகளுடன் இரண்டு MAMP களுக்கும் இரண்டு சோதனை ஓட்டங்கள் நடத்தப்பட்டன.

முன்பு விவரிக்கப்பட்டபடி ROS மதிப்பீடுகள் மேற்கொள்ளப்பட்டன.சுருக்கமாக, ஒவ்வொரு வரிக்கும், 3 வெவ்வேறு தொட்டிகளில் ஆறு விதைகள் நடப்பட்டன.விளைந்த நாற்றுகளிலிருந்து, சீரான தன்மையின் அடிப்படையில் மூன்று தேர்ந்தெடுக்கப்பட்டன.வழக்கத்திற்கு மாறான அல்லது குறிப்பிடத்தக்க அளவு உயரமான அல்லது பெரும்பான்மையை விடக் குறைவான நாற்றுகள் பயன்படுத்தப்படவில்லை.3 மிமீ விட்டம் கொண்ட நான்கு இலை வட்டுகள் மூன்று வெவ்வேறு 15 நாள் சோளச் செடிகளின் 4 வது இலையின் பரந்த பகுதியிலிருந்து அகற்றப்பட்டன.இரண்டு செடிகளில் இருந்து ஒரு இலைக்கு ஒரு வட்டு மற்றும் ஒரு செடியிலிருந்து இரண்டு டிஸ்க்குகள், இரண்டாவது வட்டு நீர் கட்டுப்பாட்டாக மாறுகிறது (கீழே காண்க).டிஸ்க்குகள் தனித்தனியாக 50 µl H20 இல் ஒரு கருப்பு 96-கிணறு தட்டில் மிதக்கப்பட்டது, ஒளியின் வெளிப்பாட்டைத் தவிர்க்க ஒரு அலுமினிய முத்திரையால் மூடப்பட்டு, ஒரே இரவில் அறை வெப்பநிலையில் வைக்கப்பட்டது.மறுநாள் காலை 2 mg/ml கெமிலுமினசென்ட் ஆய்வு L-012 (வாகோ, பட்டியல் # 120-04891), 2 mg/ml குதிரைவாலி பெராக்ஸிடேஸ் (வகை VI-A, சிக்மா-ஆல்ட்ரிச், பட்டியல் # P6782) மற்றும் 100 mg/ml Chitin அல்லது Flg22 இன் 2 μM.இந்த எதிர்வினை கரைசலில் 50 μl நான்கு கிணறுகளில் மூன்றில் சேர்க்கப்பட்டது.நான்காவது கிணறு ஒரு போலிக் கட்டுப்பாட்டாகும், இதில் MAMP ஐத் தவிர்த்து எதிர்வினை தீர்வு சேர்க்கப்பட்டது.ஒவ்வொரு தட்டிலும் தண்ணீர் மட்டுமே உள்ள நான்கு வெற்று கிணறுகளும் சேர்க்கப்பட்டுள்ளன.

எதிர்வினை தீர்வைச் சேர்த்த பிறகு, சினெர்ஜி TM 2 மல்டி-கண்டறிதல் மைக்ரோ பிளேட் ரீடரைப் (பயோடெக்) பயன்படுத்தி ஒவ்வொரு 2 நிமிடத்திற்கும் 1 மணிநேரத்திற்கு ஒளிர்வு அளவிடப்படுகிறது.பிளேட் ரீடர் இந்த 1 மணிநேரத்தில் ஒவ்வொரு 2 நிமிடத்திற்கும் ஒளிர்வு அளவீடுகளை எடுக்கிறது.அனைத்து 31 அளவீடுகளின் கூட்டுத்தொகை ஒவ்வொரு கிணறுக்கும் மதிப்பைக் கொடுக்க கணக்கிடப்பட்டது.ஒவ்வொரு மரபணு வகைக்குமான MAMP பதிலுக்கான மதிப்பிடப்பட்ட மதிப்பு (மூன்று சோதனைக் கிணறுகளின் சராசரி ஒளிர்வு மதிப்பு - போலி கிணறு மதிப்பு) - சராசரி வெற்று கிணறு மதிப்பைக் கழித்தல் என கணக்கிடப்பட்டது.வெற்று கிணறு மதிப்புகள் தொடர்ந்து பூஜ்ஜியத்திற்கு அருகில் இருந்தன.

இலை வட்டுகள்நிகோடியானா பெந்தமியானா, தரக் கட்டுப்பாட்டு நோக்கங்களுக்காக ஒவ்வொரு 96-கிணறு தட்டுகளிலும் ஒரு உயர் பதிலளிக்கக்கூடிய சோளம் வரி (SC0003), மற்றும் ஒரு குறைந்த பதிலளிக்கக்கூடிய சோளம் வரி (PI 6069) ஆகியவையும் கட்டுப்பாடுகளாக சேர்க்கப்பட்டுள்ளன.

பி. குக்கீதடுப்பூசி தயாரித்தல் மற்றும் தடுப்பூசி போடுதல்

பி. குக்கீமுன்பு விவரிக்கப்பட்டபடி inoculum தயாரிக்கப்பட்டது.சுருக்கமாக, உளுந்து தானியங்கள் மூன்று நாட்களுக்கு தண்ணீரில் ஊறவைக்கப்பட்டு, துவைக்கப்பட்டு, 1லி கூம்பு வடிவ குடுவைகளில் ஸ்கூப் செய்யப்பட்டு, 15 பிசி மற்றும் 121 டிகிரி செல்சியஸ் வெப்பநிலையில் ஒரு மணி நேரம் ஆட்டோகிளேவ் செய்யப்பட்டன.தானியங்கள் பின்னர் ஒரு புதிய கலாச்சாரத்தில் இருந்து சுமார் 5 மில்லி மசரேட்டட் மைசீலியாவுடன் தடுப்பூசி போடப்பட்டதுபி. குக்கீLSLP18 தனிமைப்படுத்தப்பட்டு, அறை வெப்பநிலையில் 2 வாரங்களுக்கு விடப்பட்டு, ஒவ்வொரு 3 நாட்களுக்கும் குடுவைகளை அசைக்கும்.2 வாரங்களுக்குப் பிறகு, பூஞ்சையால் பாதிக்கப்பட்ட உளுந்து தானியங்கள் காற்றில் உலர்த்தப்பட்டு, 4 டிகிரி செல்சியஸ் வெப்பநிலையில் வயல் தடுப்பூசி வரை சேமிக்கப்படும்.முழு சோதனைக்கும் அதே தடுப்பூசி பயன்படுத்தப்பட்டது மற்றும் ஒவ்வொரு ஆண்டும் புதியதாக செய்யப்பட்டது.தடுப்பூசி போடுவதற்காக, 6-10 பாதிக்கப்பட்ட தானியங்கள் 4-5 வார வயதுடைய சோளச் செடிகளில் வைக்கப்பட்டன.இந்த பூஞ்சைகளிலிருந்து உற்பத்தி செய்யப்படும் வித்திகள் ஒரு வாரத்திற்குள் இளம் சோள செடிகளில் தொற்றுநோயைத் தூண்டின.

விதை தயாரிப்பு

வயலில் உளுந்து விதையை நடவு செய்வதற்கு முன் பூஞ்சைக் கொல்லி, பூச்சிக்கொல்லி மற்றும் பாதுகாப்பான கலவையுடன் ~ 1% ஸ்பைராடோ 480 FS பூஞ்சைக் கொல்லி, 4% Sebring 480 FS பூஞ்சைக் கொல்லி, 3% Sorpro 940 ES விதை பாதுகாப்பான் ஆகியவற்றைக் கொண்டு நேர்த்தி செய்ய வேண்டும்.பின்னர் விதைகளை 3 நாட்களுக்கு காற்றில் உலர்த்தியது, விதைகளைச் சுற்றி இந்த கலவையின் மெல்லிய பூச்சு கிடைத்தது.ட்யூவல் மேக்னம் என்ற களைக்கொல்லி மருந்தை முன்கூட்டிய சிகிச்சையாக பயன்படுத்த பாதுகாப்பானது அனுமதித்தது.

இலக்கு இலைப்புள்ளி எதிர்ப்பின் மதிப்பீடு

ஜூன் 14-15 2017 மற்றும் ஜூன் 20, 2018 அன்று Clayton, NC இல் உள்ள மத்திய பயிர்கள் ஆராய்ச்சி நிலையத்தில் SCP பயிரிடப்பட்டது.சோதனைகள் 1.8 மீ ஒற்றை வரிசைகளில் 0.9 மீ வரிசை அகலத்துடன் ஒரு நிலத்திற்கு 10 விதைகளைப் பயன்படுத்தி நடப்பட்டன.விளிம்பு விளைவுகளைத் தடுக்க ஒவ்வொரு பரிசோதனையின் சுற்றளவிலும் இரண்டு எல்லை வரிசைகள் நடப்பட்டன.சோதனைகள் ஜூலை 20, 2017 மற்றும் ஜூலை 20, 2018 இல் தடுப்பூசி போடப்பட்டன, அப்போது சோளம் செடிகள் வளர்ச்சி நிலை 3 இல் இருந்தன. மதிப்பீடுகள் ஒன்று முதல் ஒன்பது அளவுகளில் எடுக்கப்பட்டன, அங்கு நோய் அறிகுறிகளைக் காட்டாத தாவரங்கள் ஒன்பது மற்றும் முழுமையாக மதிப்பீடு செய்யப்பட்டன. இறந்த செடிகள் ஒன்று என அடிக்கப்பட்டது .ஒவ்வொரு ஆண்டும் தடுப்பூசி போட்ட இரண்டு வாரங்களுக்குப் பிறகு 2017 இல் இரண்டு மதிப்பீடுகளும், 2018 இல் நான்கு அளவீடுகளும் எடுக்கப்பட்டன.sAUDPC (நோய் முன்னேற்ற வளைவின் கீழ் தரப்படுத்தப்பட்ட பகுதி) முன்பு விவரிக்கப்பட்டபடி கணக்கிடப்பட்டது.