சோளத்தில் MAMP- தூண்டப்பட்ட பாதுகாப்பு மறுமொழியின் வலிமை மற்றும் இலக்கு இலைப்புள்ளிக்கு எதிரான எதிர்ப்பின் மரபணு அளவிலான சங்க பகுப்பாய்வு.

தாவர மற்றும் நோய்க்கிருமி பொருட்கள்

இல்லினாய்ஸ் பல்கலைக்கழகத்தில் (இப்போது UC டேவிஸில்) டாக்டர் பாட் பிரவுன் என்பவரால் சோளம் மாற்று மக்கள் தொகை (SCP) எனப்படும் சோளம் சங்க மேப்பிங் மக்கள் தொகை வழங்கப்பட்டது. இது முன்னர் விவரிக்கப்பட்டுள்ளது மற்றும் அமெரிக்க சூழல்களில் தாவரங்களின் வளர்ச்சி மற்றும் வளர்ச்சியை எளிதாக்குவதற்காக ஒளிக்கால-உணர்வின்மை மற்றும் சிறிய உயரமாக மாற்றப்பட்ட பல்வேறு கோடுகளின் தொகுப்பாகும். மோசமான முளைப்பு மற்றும் பிற தரக் கட்டுப்பாட்டு சிக்கல்கள் காரணமாக, மூன்று பண்புகளின் பகுப்பாய்விலும் அனைத்து கோடுகளும் பயன்படுத்தப்படவில்லை என்றாலும், இந்த மக்கள்தொகையிலிருந்து 510 கோடுகள் இந்த ஆய்வில் பயன்படுத்தப்பட்டன. இறுதியில் கைட்டின் பதிலின் பகுப்பாய்விற்கு 345 கோடுகளிலிருந்தும், flg22 பதிலுக்கு 472 கோடுகள் மற்றும் TLS எதிர்ப்பிற்கு 456 கோடுகளிலிருந்தும் தரவு பயன்படுத்தப்பட்டது.பி. குக்கீஆர்கன்சாஸ் பல்கலைக்கழகத்தில் டாக்டர் பர்ட் ப்ளூமிடமிருந்து LSLP18 திரிபு பெறப்பட்டது.

MAMP மறுமொழி அளவீடு

இந்த ஆய்வில் இரண்டு வெவ்வேறு MAMPகள் பயன்படுத்தப்பட்டன flg22, (ஜென்ஸ்கிரிப்ட் பட்டியல் # RP19986), மற்றும் கைட்டின். கிரீன்ஹவுஸில் மண் நிரப்பப்பட்ட தட்டையான இடங்களில் (33% சன்ஷைன் ரெடி-எர்த் புரோ க்ரோயிங் மிக்ஸ்) அமைக்கப்பட்ட செருகல்களில் சோளம் செடிகள் வளர்க்கப்பட்டன. சேகரிக்கும் நாளில் கூடுதல் இலை ஈரப்பதத்தைத் தவிர்க்க மாதிரி சேகரிப்புக்கு முந்தைய நாள் தாவரங்களுக்கு தண்ணீர் பாய்ச்சப்பட்டது.

வரிசைகள் சீரற்ற முறையில் அமைக்கப்பட்டு, தளவாட காரணங்களுக்காக, 60 வரிசைகள் கொண்ட தொகுதிகளாக நடப்பட்டன. ஒவ்வொரு வரிசைக்கும், ஒரு வரிசைக்கு இரண்டு விதைகள் கொண்ட மூன்று 'தொட்டிகள்' நடப்பட்டன. முழு மக்கள்தொகையும் மதிப்பிடப்படும் வரை, முந்தைய தொகுதி செயலாக்கப்பட்டவுடன் அடுத்தடுத்த தொகுதிகள் நடப்பட்டன. இரண்டு வரிசைகளிலும் மரபணு வகைகள் மீண்டும் சீரற்ற முறையில் மாற்றப்பட்ட இரண்டு MAMP களுக்கும் இரண்டு சோதனை ஓட்டங்கள் நடத்தப்பட்டன.

முன்னர் விவரிக்கப்பட்டபடி ROS மதிப்பீடுகள் மேற்கொள்ளப்பட்டன. சுருக்கமாக, ஒவ்வொரு வரிசைக்கும், ஆறு விதைகள் 3 வெவ்வேறு தொட்டிகளில் நடப்பட்டன. இதன் விளைவாக வந்த நாற்றுகளிலிருந்து, சீரான தன்மையின் அடிப்படையில் மூன்று தேர்ந்தெடுக்கப்பட்டன. வழக்கத்திற்கு மாறாகத் தெரிந்த அல்லது பெரும்பாலானவற்றை விட கணிசமாக உயரமாகவோ அல்லது குட்டையாகவோ இருந்த நாற்றுகள் பயன்படுத்தப்படவில்லை. 15 நாள் வயதுடைய மூன்று வெவ்வேறு சோளச் செடிகளின் 4வது இலையின் அகலமான பகுதியிலிருந்து 3 மிமீ விட்டம் கொண்ட நான்கு இலை வட்டுகள் பிரித்தெடுக்கப்பட்டன. இரண்டு தாவரங்களிலிருந்து ஒரு இலைக்கு ஒரு வட்டு மற்றும் ஒரு தாவரத்திலிருந்து இரண்டு வட்டு, இரண்டாவது வட்டு நீர் கட்டுப்பாட்டாக மாறியது (கீழே காண்க). வட்டுகள் தனித்தனியாக 50 µl H20 இல் ஒரு கருப்பு 96-கிணறு தட்டில் மிதக்கப்பட்டன, ஒளியின் வெளிப்பாட்டைத் தவிர்க்க அலுமினிய முத்திரையுடன் மூடப்பட்டு, இரவு முழுவதும் அறை வெப்பநிலையில் வைக்கப்பட்டன. மறுநாள் காலை 2 மி.கி/மி.லி கெமிலுமினசென்ட் ப்ரோப் L-012 (வகோ, பட்டியல் # 120-04891), 2 மி.கி/மி.லி ஹார்ஸ்ராடிஷ் பெராக்ஸிடேஸ் (வகை VI-A, சிக்மா-ஆல்ட்ரிச், பட்டியல் # P6782), மற்றும் 100 மி.கி/மி.லி சிடின் அல்லது 2 μM Flg22 ஆகியவற்றைப் பயன்படுத்தி ஒரு எதிர்வினை தீர்வு தயாரிக்கப்பட்டது. இந்த எதிர்வினை கரைசலில் 50 µl நான்கு கிணறுகளில் மூன்றில் சேர்க்கப்பட்டது. நான்காவது கிணறு ஒரு போலி கட்டுப்பாட்டாக இருந்தது, அதில் MAMP ஐத் தவிர்த்து எதிர்வினை தீர்வு சேர்க்கப்பட்டது. ஒவ்வொரு தட்டிலும் தண்ணீர் மட்டுமே கொண்ட நான்கு வெற்று கிணறுகளும் சேர்க்கப்பட்டன.

எதிர்வினை கரைசலைச் சேர்த்த பிறகு, சினெர்ஜி™ 2 மல்டி-டிடெக்ஷன் மைக்ரோபிளேட் ரீடர் (பயோடெக்) ஐப் பயன்படுத்தி 1 மணிநேரத்திற்கு ஒவ்வொரு 2 நிமிடங்களுக்கும் ஒளிர்வு அளவிடப்பட்டது. இந்த 1 மணிநேரத்தில் தட்டு ரீடர் ஒவ்வொரு 2 நிமிடங்களுக்கும் ஒளிர்வு அளவீடுகளை எடுக்கிறது. ஒவ்வொரு கிணற்றுக்கும் மதிப்பைக் கொடுக்க அனைத்து 31 அளவீடுகளின் கூட்டுத்தொகை கணக்கிடப்பட்டது. ஒவ்வொரு மரபணு வகைக்கும் MAMP பதிலுக்கான மதிப்பிடப்பட்ட மதிப்பு (மூன்று சோதனை கிணறுகளின் சராசரி ஒளிர்வு மதிப்பு - போலி கிணறு மதிப்பு) - சராசரி வெற்று கிணறு மதிப்பைக் கழித்தல் என கணக்கிடப்பட்டது. வெற்று கிணறு மதிப்புகள் தொடர்ந்து பூஜ்ஜியத்திற்கு அருகில் இருந்தன.

இலை வட்டுகள்நிக்கோடியானா பெந்தமியானா, தரக் கட்டுப்பாட்டு நோக்கங்களுக்காக ஒவ்வொரு 96-கிணறு தகட்டிலும் ஒரு உயர் பதிலளிக்கக்கூடிய சோளம் வரிசை (SC0003), மற்றும் ஒரு குறைந்த பதிலளிக்கக்கூடிய சோளம் வரிசை (PI 6069) ஆகியவை கட்டுப்பாடுகளாக சேர்க்கப்பட்டன.

பி. குக்கீஇனோகுலம் தயாரிப்பு மற்றும் தடுப்பூசி

பி. குக்கீமுன்னர் விவரிக்கப்பட்டபடி இனோகுலம் தயாரிக்கப்பட்டது. சுருக்கமாக, சோள தானியங்கள் மூன்று நாட்கள் தண்ணீரில் ஊறவைக்கப்பட்டு, கழுவப்பட்டு, 1 லிட்டர் கூம்பு பிளாஸ்க்குகளில் எடுத்து, 15psi மற்றும் 121 °C வெப்பநிலையில் ஒரு மணி நேரம் ஆட்டோகிளேவ் செய்யப்பட்டன. பின்னர் தானியங்கள் புதிய வளர்ப்பிலிருந்து சுமார் 5 மில்லி மெசரேட்டட் மைசீலியாவுடன் செலுத்தப்பட்டன.பி. குக்கீLSLP18 தனிமைப்படுத்தப்பட்டு, அறை வெப்பநிலையில் 2 வாரங்களுக்கு விடப்பட்டு, ஒவ்வொரு 3 நாட்களுக்கு ஒருமுறை பிளாஸ்க்குகளை அசைத்தது. 2 வாரங்களுக்குப் பிறகு, பூஞ்சையால் பாதிக்கப்பட்ட சோள தானியங்கள் காற்றில் உலர்த்தப்பட்டு, பின்னர் வயலில் தடுப்பூசி போடப்படும் வரை 4 °C இல் சேமிக்கப்பட்டன. அதே இனோகுலம் முழு சோதனைக்கும் பயன்படுத்தப்பட்டது மற்றும் ஒவ்வொரு ஆண்டும் புதிதாக தயாரிக்கப்பட்டது. தடுப்பூசி போடுவதற்கு, 6-10 பாதிக்கப்பட்ட தானியங்கள் 4-5 வார வயதுடைய சோள செடிகளின் சுழலில் வைக்கப்பட்டன. இந்த பூஞ்சைகளிலிருந்து உற்பத்தி செய்யப்படும் வித்துகள் ஒரு வாரத்திற்குள் இளம் சோள செடிகளில் தொற்றுநோயைத் தொடங்கின.

விதை தயாரிப்பு

வயலில் நடவு செய்வதற்கு முன், சோள விதைகளை பூஞ்சைக் கொல்லி, பூச்சிக்கொல்லி மற்றும் சேஃப்னர் கலவையுடன் ~ 1% ஸ்பைரேட்டோ 480 FS பூஞ்சைக் கொல்லி, 4% செப்ரிங் 480 FS பூஞ்சைக் கொல்லி, 3% சோர்ப்ரோ 940 ES விதைப் பாதுகாப்புக் கொல்லி ஆகியவற்றைக் கொண்டு சிகிச்சையளிக்கப்பட்டது. பின்னர் விதைகளை 3 நாட்களுக்கு காற்றில் உலர்த்தியது, இது விதைகளைச் சுற்றி இந்தக் கலவையின் மெல்லிய பூச்சை வழங்கியது. சேஃப்னர் களைக்கொல்லியான டூயல் மேக்னத்தை முளைப்பதற்கு முந்தைய சிகிச்சையாகப் பயன்படுத்த அனுமதித்தது.

இலக்கு இலைப்புள்ளி எதிர்ப்பை மதிப்பீடு செய்தல்

SCP, ஜூன் 14–15 2017 மற்றும் ஜூன் 20, 2018 ஆகிய தேதிகளில் NC, Clayton இல் உள்ள மத்திய பயிர் ஆராய்ச்சி நிலையத்தில் சீரற்ற முழுமையான தொகுதி வடிவமைப்பில், ஒவ்வொரு சந்தர்ப்பத்திலும் இரண்டு சோதனை பிரதிகளுடன் நடப்பட்டது. சோதனைகள் 1.8 மீ ஒற்றை வரிசைகளில் 0.9 மீ வரிசை அகலத்துடன், ஒரு நிலத்திற்கு 10 விதைகளைப் பயன்படுத்தி நடப்பட்டன. விளிம்பு விளைவுகளைத் தடுக்க ஒவ்வொரு பரிசோதனையின் சுற்றளவிலும் இரண்டு எல்லை வரிசைகள் நடப்பட்டன. சோதனைகள் ஜூலை 20, 2017 மற்றும் ஜூலை 20, 2018 ஆகிய தேதிகளில் தடுப்பூசி போடப்பட்டன, அந்த நேரத்தில் சோளம் தாவரங்கள் வளர்ச்சி நிலை 3 இல் இருந்தன. ஒன்று முதல் ஒன்பது அளவுகளில் மதிப்பீடுகள் எடுக்கப்பட்டன, அங்கு நோயின் அறிகுறிகள் எதுவும் காட்டாத தாவரங்கள் ஒன்பது ஆகவும், முற்றிலும் இறந்த தாவரங்கள் ஒன்று ஆகவும் மதிப்பிடப்பட்டன. 2017 இல் இரண்டு மதிப்பீடுகளும், ஒவ்வொரு ஆண்டும் தடுப்பூசி போடப்பட்ட இரண்டு வாரங்களுக்குப் பிறகு 2018 இல் நான்கு அளவீடுகளும் எடுக்கப்பட்டன. sAUDPC (நோய் முன்னேற்ற வளைவின் கீழ் தரப்படுத்தப்பட்ட பகுதி) முன்பு விவரிக்கப்பட்டபடி கணக்கிடப்பட்டது.