தாவர நுண்குழாய்களைப் பாதிக்கும் நாவல் தாவர வளர்ச்சி தடுப்பான்களாக உர்சா மோனோமைடுகளின் கண்டுபிடிப்பு, குணாதிசயம் மற்றும் செயல்பாட்டு மேம்பாடு.

Nature.com ஐப் பார்வையிட்டதற்கு நன்றி.நீங்கள் பயன்படுத்தும் உலாவியின் பதிப்பு குறைந்த CSS ஆதரவைக் கொண்டுள்ளது.சிறந்த முடிவுகளுக்கு, உங்கள் உலாவியின் புதிய பதிப்பைப் பயன்படுத்துமாறு பரிந்துரைக்கிறோம் (அல்லது Internet Explorer இல் பொருந்தக்கூடிய பயன்முறையை முடக்கவும்).இதற்கிடையில், தற்போதைய ஆதரவை உறுதிப்படுத்த, ஸ்டைலிங் அல்லது ஜாவாஸ்கிரிப்ட் இல்லாமல் தளத்தைக் காண்பிக்கிறோம்.
இயற்கை பொருட்களின் கண்டுபிடிப்பு மற்றும் பயனுள்ள பயன்பாடு மனித வாழ்க்கையை மேம்படுத்த உதவும்.தாவர வளர்ச்சியைத் தடுக்கும் இரசாயனங்கள் களைகளைக் கட்டுப்படுத்த களைக்கொல்லிகளாகப் பரவலாகப் பயன்படுத்தப்படுகின்றன.பல்வேறு வகையான களைக்கொல்லிகளைப் பயன்படுத்த வேண்டியதன் காரணமாக, புதிய செயல்பாட்டு வழிமுறைகளுடன் கலவைகளை அடையாளம் காண வேண்டிய அவசியம் உள்ளது.இந்த ஆய்வில், ஸ்ட்ரெப்டோமைசஸ் வெராயென்சிஸ் MK493-CF1 இலிருந்து N-alkoxypyrrole கலவை, coumamonamide என்ற நாவலைக் கண்டுபிடித்தோம் மற்றும் முழுமையான தொகுப்பு செயல்முறையை நிறுவினோம்.உயிரியல் செயல்பாடு மதிப்பீடுகள் மூலம், urs-monoamic அமிலம் urs-monoamide இன் செயற்கை இடைநிலை மற்றும் ஒரு சாத்தியம் என்பதைக் கண்டுபிடித்தோம்.தாவர வளர்ச்சி தடுப்பான்.கூடுதலாக, ஹெலா செல்களின் வளர்ச்சியை எதிர்மறையாக பாதிக்காமல் அதிக களைக்கொல்லி செயல்பாட்டைக் கொண்ட உர்பெனிலாக்ஸி டெரிவேடிவ் (யுடிஏ) உட்பட பல்வேறு அர்பெனோனிக் அமில வழித்தோன்றல்களை நாங்கள் உருவாக்கியுள்ளோம்.உர்மோடோனிக் அமில வழித்தோன்றல்கள் தாவர நுண்குழாய்களை சீர்குலைப்பதையும் நாங்கள் கண்டறிந்தோம்;கூடுதலாக, KAND ஆக்டின் இழைகளைப் பாதிக்கிறது மற்றும் உயிரணு இறப்பைத் தூண்டுகிறது;இந்த பன்முக விளைவுகள் அறியப்பட்ட நுண்குழாய் தடுப்பான்களிலிருந்து வேறுபடுகின்றன மற்றும் புதிய களைக்கொல்லிகளின் வளர்ச்சியில் ஒரு முக்கிய நன்மையைக் குறிக்கும் உர்சோனிக் அமிலத்திற்கான ஒரு புதிய வழிமுறையைப் பரிந்துரைக்கின்றன.
பயனுள்ள இயற்கை பொருட்கள் மற்றும் அவற்றின் வழித்தோன்றல்களின் கண்டுபிடிப்பு மற்றும் நடைமுறை பயன்பாடு மனித வாழ்க்கையின் தரத்தை மேம்படுத்துவதற்கான ஒரு வழிமுறையாகும்.நுண்ணுயிரிகள், தாவரங்கள் மற்றும் பூச்சிகளால் உற்பத்தி செய்யப்படும் இரண்டாம் நிலை வளர்சிதை மாற்றங்கள் மருத்துவம் மற்றும் விவசாயத்தில் பெரும் முன்னேற்றங்களுக்கு வழிவகுத்தன.பல நுண்ணுயிர் எதிர்ப்பிகள் மற்றும் லுகேமியா எதிர்ப்பு மருந்துகள் இயற்கை பொருட்களிலிருந்து உருவாக்கப்பட்டுள்ளன.கூடுதலாக, பல்வேறு வகையானபூச்சிக்கொல்லிகள், விவசாயத்தில் பயன்படுத்துவதற்காக இந்த இயற்கை பொருட்களிலிருந்து பூஞ்சைக் கொல்லிகள் மற்றும் களைக்கொல்லிகள் பிரித்தெடுக்கப்படுகின்றன.குறிப்பாக, களை கட்டுப்பாட்டு களைக்கொல்லிகள் நவீன விவசாயத்தில் பயிர் விளைச்சலை அதிகரிப்பதற்கான முக்கியமான கருவிகளாகும், மேலும் பல்வேறு வகையான கலவைகள் ஏற்கனவே வணிக ரீதியாக பயன்படுத்தப்படுகின்றன.தாவரங்களில் ஒளிச்சேர்க்கை, அமினோ அமில வளர்சிதை மாற்றம், செல் சுவர் தொகுப்பு, மைட்டோசிஸின் கட்டுப்பாடு, பைட்டோஹார்மோன் சிக்னலிங் அல்லது புரதத் தொகுப்பு போன்ற பல செல்லுலார் செயல்முறைகள் களைக்கொல்லிகளின் பொதுவான இலக்குகளாகக் கருதப்படுகின்றன.மைக்ரோடூபுல் செயல்பாட்டைத் தடுக்கும் கலவைகள் மைட்டோடிக் ஒழுங்குமுறையை பாதிப்பதன் மூலம் தாவர வளர்ச்சியை பாதிக்கும் களைக்கொல்லிகளின் பொதுவான வகையாகும்.
நுண்குழாய்கள் சைட்டோஸ்கெலட்டனின் கூறுகள் மற்றும் யூகாரியோடிக் செல்களில் பரவலாகப் பாதுகாக்கப்படுகின்றன.டூபுலின் ஹீட்டோரோடைமரில் α-டூபுலின் மற்றும் β-டூபுலின் ஆகியவை நேரியல் நுண்குழாய் புரோட்டோபிலமென்ட்களை உருவாக்குகின்றன, 13 புரோட்டோபிலமென்ட்கள் ஒரு உருளை அமைப்பை உருவாக்குகின்றன.நுண்குழாய்கள் தாவர உயிரணுக்களில் பல பாத்திரங்களை வகிக்கின்றன, இதில் உயிரணு வடிவம், செல் பிரிவு மற்றும் உள்செல்லுலார் போக்குவரத்து ஆகியவை அடங்கும்.தாவர செல்கள் இடைநிலை பிளாஸ்மா மென்படலத்தின் கீழ் நுண்குழாய்களைக் கொண்டிருக்கின்றன, மேலும் இவை கார்டிகல் நுண்குழாய்கள் என அழைக்கப்படும் செல்லுலோஸ் சின்தேஸ் வளாகங்களின் ஒழுங்குமுறை மூலம் செல்லுலோஸ் மைக்ரோஃபைப்ரில்களின் அமைப்பைக் கட்டுப்படுத்தும் என்று கருதப்படுகிறது.வேர் எபிடெர்மல் செல்களின் கார்டிகல் நுண்குழாய்கள், வேர் முனையின் விரைவான நீட்சி மண்டலத்தில் உள்ளன, அவை பக்கவாட்டாக அமைந்துள்ளன, மேலும் செல்லுலோஸ் மைக்ரோஃபைபர்கள் இந்த நுண்குழாய்களைப் பின்பற்றி செல் விரிவாக்கத்தின் திசையைக் கட்டுப்படுத்துகின்றன, இதனால் அனிசோட்ரோபிக் செல் நீட்சியை ஊக்குவிக்கிறது.எனவே, நுண்குழாய் செயல்பாடு தாவர உருவ அமைப்போடு நெருக்கமாக தொடர்புடையது.மரபணுக்களில் அமினோ அமில மாற்றீடுகள் டூபுலின் குறியீடானது கார்டிகல் நுண்குழாய் வரிசைகளின் வளைவை ஏற்படுத்துகிறது மற்றும் அரபிடோப்சிஸ் 6,7 இல் இடது அல்லது வலது பக்க வளர்ச்சியை ஏற்படுத்துகிறது.இதேபோல், நுண்குழாய் இயக்கவியலைக் கட்டுப்படுத்தும் நுண்குழாய்-தொடர்புடைய புரதங்களின் பிறழ்வுகளும் சிதைந்த வேர் வளர்ச்சிக்கு வழிவகுக்கும்8,9,10,11,12,13.கூடுதலாக, ப்ரீடிலக்லர் என்றும் அழைக்கப்படும் டிசோபிராமைடு போன்ற நுண்குழாய்களை சீர்குலைக்கும் களைக்கொல்லிகளுடன் சிகிச்சையானது இடது பக்க சாய்ந்த வேர் வளர்ச்சியை ஏற்படுத்துகிறது.தாவர வளர்ச்சியின் திசையை தீர்மானிக்க நுண்குழாய் செயல்பாட்டின் துல்லியமான ஒழுங்குமுறை முக்கியமானது என்பதை இந்தத் தகவல்கள் குறிப்பிடுகின்றன.
பல்வேறு வகையான நுண்குழாய் தடுப்பான்கள் கண்டுபிடிக்கப்பட்டுள்ளன, மேலும் இந்த மருந்துகள் சைட்டோஸ்கெலிட்டல் ஆராய்ச்சியிலும், விவசாயம் மற்றும் மருத்துவத்திலும் குறிப்பிடத்தக்க பங்களிப்பைச் செய்துள்ளன.குறிப்பாக, ஓரிசலின், டைனிட்ரோஅனிலின் சேர்மங்கள், டிஸ்பிராமைடு, பென்சாமைடு தொடர்பான சேர்மங்கள் மற்றும் அவற்றின் ஒப்புமைகள் நுண்குழாய் செயல்பாட்டைத் தடுத்து அதன் மூலம் தாவர வளர்ச்சியைத் தடுக்கும்.எனவே, அவை களைக்கொல்லிகளாக பரவலாகப் பயன்படுத்தப்படுகின்றன.இருப்பினும், நுண்குழாய்கள் தாவர மற்றும் விலங்கு உயிரணுக்களின் முக்கிய அங்கமாக இருப்பதால், பெரும்பாலான நுண்குழாய் தடுப்பான்கள் இரு உயிரணு வகைகளுக்கும் சைட்டோடாக்ஸிக் ஆகும்.எனவே, களைக்கொல்லிகளாக அவற்றின் அங்கீகரிக்கப்பட்ட பயன்பாடு இருந்தபோதிலும், குறைந்த எண்ணிக்கையிலான நுண்ணுயிர் குழாய் முகவர்கள் நடைமுறை நோக்கங்களுக்காகப் பயன்படுத்தப்படுகின்றன.
ஸ்ட்ரெப்டோமைசஸ் என்பது ஸ்ட்ரெப்டோமைசஸ் குடும்பத்தின் ஒரு இனமாகும், இதில் ஏரோபிக், கிராம்-பாசிட்டிவ், ஃபிலமென்ட்டஸ் பாக்டீரியாக்கள் உள்ளன, மேலும் இது பரந்த அளவிலான இரண்டாம் நிலை வளர்சிதை மாற்றங்களை உருவாக்கும் திறனுக்காக பரவலாக அறியப்படுகிறது.எனவே, புதிய உயிரியல் ரீதியாக செயல்படும் இயற்கை பொருட்களின் மிக முக்கியமான ஆதாரங்களில் ஒன்றாக இது கருதப்படுகிறது.தற்போதைய ஆய்வில், ஸ்ட்ரெப்டோமைசஸ் வெரான்சிஸ் MK493-CF1 மற்றும் S. வெர்ரென்சிஸ் ISP 5486 ஆகியவற்றிலிருந்து தனிமைப்படுத்தப்பட்ட coumamonamide என்ற புதிய கலவையைக் கண்டுபிடித்தோம். நிறமாலை பகுப்பாய்வு மற்றும் முழு நிறமாலை பகுப்பாய்வு ஆகியவற்றைப் பயன்படுத்தி, coumamonamide இன் அமைப்பு வகைப்படுத்தப்பட்டது மற்றும் அதன் தனித்துவமான N-alkoxyelepyrr தீர்மானிக்கப்பட்டது.தொகுப்பு.உர்ஸ்மோனிக் அமிலம், உர்ஸ்மோனோஅமைடு மற்றும் அதன் வழித்தோன்றல்களின் செயற்கை இடைநிலை, பிரபலமான மாதிரித் தாவரமான அரபிடோப்சிஸ் தலியானாவின் வளர்ச்சி மற்றும் முளைப்பதைத் தடுப்பதாகக் கண்டறியப்பட்டது.ஒரு கட்டமைப்பு-செயல்பாட்டு உறவு ஆய்வில், உர்சோனிக் அமிலத்தின் (KAND) நோன்லோக்ஸி டெரிவேடிவ் எனப்படும் உர்சோனிக் அமிலமாக மாற்றப்பட்ட C9 உடன் கூடிய கலவையானது வளர்ச்சி மற்றும் முளைப்பு மீதான தடுப்பு விளைவை கணிசமாக மேம்படுத்துகிறது என்பதைக் கண்டறிந்தோம்.புதிதாக கண்டுபிடிக்கப்பட்ட தாவர வளர்ச்சி தடுப்பானானது புகையிலை மற்றும் லிவர்வார்ட்டின் வளர்ச்சியையும் பாதித்தது மற்றும் பாக்டீரியா அல்லது ஹெலா செல்களுக்கு சைட்டோடாக்ஸிக் இல்லை என்பது குறிப்பிடத்தக்கது.மேலும், சில உர்மோடோனிக் அமில வழித்தோன்றல்கள் சிதைந்த ரூட் பினோடைப்பைத் தூண்டுகின்றன, இந்த வழித்தோன்றல்கள் நேரடியாகவோ அல்லது மறைமுகமாகவோ நுண்குழாய்களை பாதிக்கின்றன என்பதைக் குறிக்கிறது.இந்த யோசனைக்கு இணங்க, இம்யூனோஹிஸ்டோகெமிக்கல் அல்லது ஃப்ளோரசன்ட் புரதங்களுடன் பெயரிடப்பட்ட நுண்குழாய்கள் பற்றிய எங்கள் அவதானிப்புகள் KAND சிகிச்சையானது நுண்குழாய்களை டிபோலிமரைஸ் செய்கிறது என்பதைக் குறிக்கிறது.கூடுதலாக, குமாமோடோனிக் அமில வழித்தோன்றல்களுடன் சிகிச்சையானது ஆக்டின் மைக்ரோஃபிலமென்ட்களை சீர்குலைத்தது.எனவே, ஒரு புதிய தாவர வளர்ச்சி தடுப்பானை நாங்கள் கண்டுபிடித்துள்ளோம், அதன் தனித்துவமான செயல்பாடு சைட்டோஸ்கெலட்டனை அழிப்பதில் அடங்கும்.
Strain MK493-CF1 டோக்கியோவின் ஷினகாவா-குவில் மண்ணிலிருந்து தனிமைப்படுத்தப்பட்டது.ஸ்ட்ரெய்ன் MK493-CF1 நன்கு கிளைத்த ஸ்ட்ரோமல் மைசீலியத்தை உருவாக்கியது.16S ரைபோசோமால் RNA மரபணுவின் (1422 bp) பகுதி வரிசை தீர்மானிக்கப்பட்டது.இந்த திரிபு S. வெர்ரான்சிஸ் (NBRC 13404T = ISP 5486, 1421/1422 bp, T: வழக்கமான திரிபு, 99.93%) போன்றது.இந்த முடிவின் அடிப்படையில், இந்த விகாரம் S. வெரான்சிஸ் வகை விகாரத்துடன் நெருங்கிய தொடர்புடையது என்று தீர்மானிக்கப்பட்டது.எனவே, இந்த விகாரத்திற்கு தற்காலிகமாக S. verraensis MK493-CF1 என்று பெயரிட்டோம்.எஸ். வெரான்சிஸ் ஐஎஸ்பி 5486டியும் அதே உயிரியக்க கலவைகளை உருவாக்குகிறது.இந்த நுண்ணுயிரியிலிருந்து இயற்கையான பொருட்களைப் பெறுவதற்கான ஆரம்பகால ஆராய்ச்சிகள் குறைவாக இருந்ததால், மேலும் இரசாயன ஆராய்ச்சி மேற்கொள்ளப்பட்டது.14 நாட்களுக்கு 30 டிகிரி செல்சியஸ் திட-நிலை நொதித்தல் மூலம் பார்லி ஊடகத்தில் எஸ். வெரான்சிஸ் எம்.கே.493-சி.எஃப்.1 பயிரிடப்பட்ட பிறகு, நடுத்தரமானது 50% EtOH உடன் பிரித்தெடுக்கப்பட்டது.59.5 மில்லிகிராம் கச்சா சாறு பெற 60 மில்லி மாதிரி உலர்த்தப்பட்டது.கச்சா சாறு N-methoxy-1H-pyrrole-2-carboxamide (1, coumamonamide, 36.0 mg) கொடுக்க தலைகீழ் நிலை HPLCக்கு உட்படுத்தப்பட்டது.1 இன் மொத்த அளவு கச்சா சாற்றில் தோராயமாக 60% ஆகும்.எனவே, குமாமோட்டோமைடு 1 இன் பண்புகளை விரிவாக ஆய்வு செய்ய முடிவு செய்தோம்.
Coumamonamide 1 என்பது ஒரு வெள்ளை உருவமற்ற தூள் மற்றும் உயர் தெளிவுத்திறன் கொண்ட மாஸ் ஸ்பெக்ட்ரோமெட்ரி (HRESIMS) C6H8N2O2 (படம் 1) உறுதிப்படுத்துகிறது.இந்த சேர்மத்தின் C2-பதிலீடு செய்யப்பட்ட பைரோல் துண்டு δH 6.94 (1H, t, J = 2.8, 4.8 Hz, H-4), δH 6.78 (1H, d, J = 2.5, δH 1H NMR 5 Hzz: 4. , H-5) மற்றும் δH 6.78 (1H, d, J = 2.5 Hz, H-6), மற்றும் 13C NMR ஸ்பெக்ட்ரம் நான்கு sp2 கார்பன் அணுக்கள் இருப்பதைக் காட்டுகிறது.C2 நிலையில் ஒரு அமைடு குழுவின் இருப்பு, δC 161.1 இல் C-3 புரோட்டானிலிருந்து அமைடு கார்போனைல் கார்பனுக்கு HMBC தொடர்பு மூலம் மதிப்பிடப்பட்டது.கூடுதலாக, δH 4.10 (3H, S) மற்றும் δC 68.3 இல் 1 H மற்றும் 13 C NMR உச்சநிலைகள் மூலக்கூறில் N-மெத்தாக்ஸி குழுக்கள் இருப்பதைக் குறிக்கிறது.மெத்தாக்ஸி குழுவின் சரியான நிலை இன்னும் மேம்படுத்தப்பட்ட வேறுபாடு ஸ்பெக்ட்ரோஸ்கோபி மற்றும் நியூக்ளியர் ஓவர்ஹவுசர் சுருக்கம் (NOEDF) போன்ற ஸ்பெக்ட்ரோஸ்கோபிக் பகுப்பாய்வைப் பயன்படுத்தி தீர்மானிக்கப்படவில்லை என்றாலும், N-methoxy-1H-pyrrole-2-carboxamide முதல் வேட்பாளர் கலவை ஆனது.
1 இன் சரியான கட்டமைப்பைத் தீர்மானிக்க, மொத்த தொகுப்பு செய்யப்பட்டது (படம் 2a).வணிக ரீதியாக கிடைக்கும் 2-அமினோபிரைடின் 2ஐ m-CPBA உடன் சிகிச்சை செய்ததன் விளைவாக, அளவு விளைச்சலில் தொடர்புடைய N-ஆக்சைடு 3 ஆனது.2 இன் 2-அமினோஅசிடேஷனுக்குப் பிறகு, அப்ரமோவிச் விவரித்த சைக்ளோகன்டென்சேஷன் வினையானது பென்சீனில் 90 டிகிரி செல்சியஸ் வெப்பநிலையில் மேற்கொள்ளப்பட்டது, அது விரும்பிய 1-ஹைட்ராக்ஸி-1ஹெச்-பைரோல்-2-கார்பனிட்ரைல் 5 கிராம் பெறப்பட்டது.வேகம் 60% (இரண்டு நிலைகள்).15,16.மெத்திலேஷன் மற்றும் 4 இன் நீராற்பகுப்பு பின்னர் 1-மெத்தாக்ஸி-1எச்-பைரோல்-2-கார்பாக்சிலிக் அமிலத்தை ("குமோடோனிக் அமிலம்", 6 என்று அழைக்கப்படுகிறது) நல்ல விளைச்சலில் (70%, இரண்டு படிகள்) கொடுத்தது.இறுதியாக, அக்வஸ் அம்மோனியாவைப் பயன்படுத்தி அமில குளோரைடு இடைநிலை 6 வழியாக அமிடேஷன் 98% மகசூலில் குமாமோட்டோ அமைடு 1 ஐக் கொடுத்தது.ஒருங்கிணைக்கப்பட்ட 1 இன் அனைத்து நிறமாலை தரவுகளும் தனிமைப்படுத்தப்பட்ட 1 ஐப் போலவே இருந்தன, எனவே 1 இன் அமைப்பு தீர்மானிக்கப்பட்டது;
உர்பெனமைடு மற்றும் உர்பெனிக் அமிலத்தின் உயிரியல் செயல்பாட்டின் பொது தொகுப்பு மற்றும் பகுப்பாய்வு.(அ) ​​குமாமோட்டோ அமைடின் மொத்த தொகுப்பு.(ஆ) ஏழு நாள் பழமையான காட்டு-வகை அரபிடோப்சிஸ் கொலம்பியா (கோல்) நாற்றுகள் முராஷிகே மற்றும் ஸ்கூக் (எம்எஸ்) தகடுகளில் கூமமோனமைடு 6 அல்லது கூமமோனமைடு 1 ஆகியவற்றைக் குறிப்பிடப்பட்ட செறிவுகளில் வளர்க்கப்பட்டன.அளவுகோல் = 1 செ.மீ.
முதலில், தாவர வளர்ச்சியை மாற்றியமைக்கும் திறனுக்காக உர்பெனமைடு மற்றும் அதன் இடைநிலைகளின் உயிரியல் செயல்பாடுகளை மதிப்பீடு செய்தோம்.MS agar ஊடகத்தில் ursmonamide 1 அல்லது ursmonic acid 6 இன் பல்வேறு செறிவுகளையும் இந்த ஊடகத்தில் வளர்ப்பு அரபிடோப்சிஸ் தலியானா நாற்றுகளையும் சேர்த்துள்ளோம்.இந்த மதிப்பீடுகள் 6 இன் அதிக செறிவுகள் (500 μM) வேர் வளர்ச்சியைத் தடுக்கின்றன (படம் 2b).அடுத்து, 6 இன் N1 நிலையை மாற்றுவதன் மூலம் பல்வேறு வழித்தோன்றல்களை உருவாக்கி, அவற்றின் மீது கட்டமைப்பு-செயல்பாட்டு உறவு ஆய்வுகளை மேற்கொண்டோம் (அனலாக் தொகுப்பு செயல்முறை துணைத் தகவல் (SI) இல் விவரிக்கப்பட்டுள்ளது).அரபிடோப்சிஸ் நாற்றுகள் 50 μM உர்சோனிக் அமில வழித்தோன்றல்களைக் கொண்ட ஒரு ஊடகத்தில் வளர்க்கப்பட்டன, மேலும் வேர் நீளம் அளவிடப்பட்டது.படத்தில் காட்டப்பட்டுள்ளபடி.புள்ளிவிவரங்கள் 3a, b மற்றும் S1 இல் காட்டப்பட்டுள்ளபடி, கூமாமோ அமிலங்கள் N1 நிலையில் வெவ்வேறு நீளமான நேரியல் ஆல்காக்ஸி சங்கிலிகள் (9, 10, 11, 12 மற்றும் 13) அல்லது பெரிய ஆல்காக்ஸி சங்கிலிகள் (15, 16 மற்றும் 17) உள்ளன.வழித்தோன்றல்கள் வேர் வளர்ச்சியின் குறிப்பிடத்தக்க தடுப்பைக் காட்டின.கூடுதலாக, 200 μM 10, 11 அல்லது 17 பயன்பாடு முளைப்பதைத் தடுக்கிறது (படங்கள் 3c மற்றும் S2).
குமாமோட்டோ அமைடு மற்றும் தொடர்புடைய சேர்மங்களின் கட்டமைப்பு-செயல்பாட்டு உறவு பற்றிய ஆய்வு.(அ) ​​ஒப்புமைகளின் அமைப்பு மற்றும் தொகுப்புத் திட்டம்.(ஆ) 50 μM கூமமோனமைடு வழித்தோன்றல்களுடன் அல்லது இல்லாமல் MS நடுத்தரத்தில் வளர்க்கப்பட்ட 7 நாள் வயதுடைய நாற்றுகளின் வேர் நீளத்தை அளவிடுதல்.நட்சத்திரக் குறியீடுகள் போலி சிகிச்சையில் குறிப்பிடத்தக்க வேறுபாடுகளைக் குறிக்கின்றன (டி டெஸ்ட், ப<0.05).n>18. தரவு சராசரி ± SD ஆகக் காட்டப்படுகிறது.nt என்றால் "சோதனை செய்யப்படவில்லை", ஏனெனில் 50% க்கும் அதிகமான விதைகள் முளைக்கவில்லை.(இ) 200 μM கூமமோனமைடு மற்றும் தொடர்புடைய சேர்மங்களுடன் அல்லது இல்லாமல் MS ஊடகத்தில் 7 நாட்களுக்கு அடைகாக்கப்பட்ட விதைகளின் முளைப்பு விகிதத்தை அளவிடுதல்.நட்சத்திரக் குறியீடுகள் போலி சிகிச்சையுடன் குறிப்பிடத்தக்க வேறுபாடுகளைக் குறிக்கின்றன (சி-சதுர சோதனை).n=96.
சுவாரஸ்யமாக, C9 ஐ விட நீளமான அல்கைல் பக்கச் சங்கிலிகளைச் சேர்ப்பது தடுப்புச் செயல்பாட்டைக் குறைத்தது, குமாமோடோயிக் அமிலம் தொடர்பான சேர்மங்களுக்கு அவற்றின் உயிரியல் செயல்பாட்டை வெளிப்படுத்த ஒரு குறிப்பிட்ட அளவிலான பக்கச் சங்கிலிகள் தேவை என்று பரிந்துரைக்கிறது.
கட்டமைப்பு-செயல்பாட்டு உறவு பகுப்பாய்வு C9 உர்சோனிக் அமிலமாக மாற்றப்பட்டது மற்றும் உர்சோனிக் அமிலத்தின் nonyloxy வழித்தோன்றல் (இனி KAND 11 என குறிப்பிடப்படுகிறது) மிகவும் பயனுள்ள தாவர வளர்ச்சி தடுப்பானாக இருந்ததால், KAND 11 இன் விரிவான குணாதிசயத்தை நாங்கள் மேற்கொண்டோம். அரபிடோப்சிஸ் சிகிச்சை 50 μM KAND 11 உடன் முளைப்பதை முற்றிலும் தடுக்கிறது, அதேசமயம் KAND 11 இன் குறைந்த செறிவுகள் (40, 30, 20, அல்லது 10 μM) டோஸ்-சார்ந்த முறையில் வேர் வளர்ச்சியைத் தடுக்கின்றன (படம் 4a, b).KAND 11 ஆனது ரூட் மெரிஸ்டெம் நம்பகத்தன்மையை பாதிக்கிறதா என்பதைச் சோதிக்க, ப்ரோபிடியம் அயோடைடு (PI) மற்றும் அளவிடப்பட்ட மெரிஸ்டெம் பகுதி அளவைக் கொண்ட ரூட் மெரிஸ்டெம்களை ஆய்வு செய்தோம்.25 μM KAND-11 கொண்ட ஒரு ஊடகத்தில் வளர்க்கப்படும் நாற்றுகளின் மெரிஸ்டெம் அளவு 151.1 ± 32.5 μm ஆகும், அதே சமயம் DMSO உள்ள கட்டுப்பாட்டு ஊடகத்தில் வளர்க்கப்படும் நாற்றுகளின் மெரிஸ்டெம் அளவு 264.7 ± 30.8 μm (படம். 4c, , இது KAND-11 செல்லுலார் செயல்பாட்டை மீட்டெடுக்கிறது என்பதைக் குறிக்கிறது.பரவுகிறது.ரூட் மெரிஸ்டெம்.இதற்கு இணங்க, KAND 11 சிகிச்சையானது ரூட் மெரிஸ்டெமில் உள்ள செல் பிரிவு மார்க்கர் CDKB2;1p::CDKB2;1-GUS சமிக்ஞையின் அளவைக் குறைத்தது (படம். 4e) 17 .இந்த முடிவுகள் KAND 11 செல் பெருக்கம் செயல்பாட்டைக் குறைப்பதன் மூலம் வேர் வளர்ச்சியைத் தடுக்கிறது என்பதைக் குறிக்கிறது.
வளர்ச்சியில் உர்பெனோனிக் அமில வழித்தோன்றல்களின் (urbenyloxy derivatives) தடுப்பு விளைவு பற்றிய பகுப்பாய்வு.(அ) ​​KAND 11 இன் குறிப்பிடப்பட்ட செறிவுகளுடன் MS தகடுகளில் வளர்க்கப்படும் 7-நாள் வயதுடைய காட்டு-வகை கோல் நாற்றுகள். ஸ்கேல் பார் = 1 செ.மீ.(ஆ) வேர் நீளத்தின் அளவு.கடிதங்கள் குறிப்பிடத்தக்க வேறுபாடுகளைக் குறிக்கின்றன (டுகே HSD சோதனை, ப<0.05).n>16. தரவு சராசரி ± SD ஆகக் காட்டப்படுகிறது.(c) 25 μM KAND உடன் அல்லது இல்லாமல் MS தகடுகளில் வளர்க்கப்படும் ப்ரோபிடியம் அயோடைடு படிந்த காட்டு-வகை கோல் வேர்களின் கன்ஃபோகல் மைக்ரோஸ்கோபி 11. வெள்ளை அடைப்புக்குறிகள் ரூட் மெரிஸ்டெமைக் குறிக்கின்றன.அளவுகோல் = 100 μm.(ஈ) ரூட் மெரிஸ்டெம் அளவின் அளவு (n = 10 முதல் 11 வரை).புள்ளியியல் வேறுபாடுகள் டி-டெஸ்ட்டைப் பயன்படுத்தி தீர்மானிக்கப்பட்டது (ப<0.05).பார்கள் சராசரி மெரிஸ்டெம் அளவைக் குறிக்கின்றன.(இ) CDKB2 கட்டமைப்பைக் கொண்ட ஒரு ரூட் மெரிஸ்டெமின் வேறுபட்ட குறுக்கீடு மாறுபாடு (DIC) நுண்ணோக்கி;1ப்ரோ: CDKB2;25 µM KAND மதிப்பீட்டுடன் அல்லது இல்லாமல் MS தகடுகளில் வளர்க்கப்பட்ட 5-நாள் வயதுடைய நாற்றுகளில் 1-GUS படிந்த மற்றும் கறை படிந்துள்ளது.
KAND 11 இன் பைட்டோடாக்சிசிட்டி மற்றொரு இருவகை தாவரமான புகையிலை (நிகோடியானா டபாகம்) மற்றும் ஒரு பெரிய நில தாவர மாதிரி உயிரினமான லிவர்வார்ட் (மார்ச்சண்டியா பாலிமார்பா) ஆகியவற்றைப் பயன்படுத்தி மேலும் சோதிக்கப்பட்டது.அரபிடோப்சிஸைப் போலவே, 25 μM KAND 11 கொண்ட நடுத்தரத்தில் வளர்க்கப்படும் புகையிலை SR-1 நாற்றுகள் குறுகிய வேர்களை உருவாக்குகின்றன (படம் 5a).கூடுதலாக, 48 விதைகளில் 40 விதைகள் 200 μM KAND 11 கொண்ட தட்டுகளில் முளைத்தன, அதேசமயம் அனைத்து 48 விதைகளும் போலி-சிகிச்சையளிக்கப்பட்ட ஊடகங்களில் முளைத்தன, இது KAND இன் அதிக செறிவுகள் குறிப்பிடத்தக்கவை என்பதைக் குறிக்கிறது (ப.<0.05;chi test -square) புகையிலை முளைப்பதைத் தடுக்கிறது.(படம் 5b).கூடுதலாக, லிவர்வார்ட்டில் பாக்டீரியா வளர்ச்சியைத் தடுக்கும் KAND 11 இன் செறிவு அரபிடோப்சிஸில் (படம் 5c) பயனுள்ள செறிவை ஒத்திருந்தது.இந்த முடிவுகள் KAND 11 பல்வேறு தாவரங்களின் வளர்ச்சியைத் தடுக்கும் என்பதைக் குறிக்கிறது.பிற உயிரினங்களில் உள்ள கரடி மோனோமைடு தொடர்பான சேர்மங்களின் சாத்தியமான சைட்டோடாக்சிசிட்டியை நாங்கள் ஆராய்ந்தோம், அதாவது மனித ஹெலா செல்கள் மற்றும் எஸ்கெரிச்சியா கோலி ஸ்ட்ரெய்ன் DH5α, முறையே அதிக விலங்கு மற்றும் பாக்டீரியா உயிரணுக்களின் பிரதிநிதிகளாக.செல் பெருக்க மதிப்பீடுகளின் தொடரில், கூமமோனமைடு 1, கூமோமோனாமிடிக் அமிலம் 6 மற்றும் KAND 11 ஆகியவை 100 μM (படம் 5d,e) செறிவுகளில் HeLa அல்லது E. coli செல்களின் வளர்ச்சியைப் பாதிக்கவில்லை என்பதைக் கவனித்தோம்.
அரபிடோப்சிஸ் அல்லாத உயிரினங்களில் KAND 11 இன் வளர்ச்சி தடுப்பு.(அ) ​​இரண்டு வார வயதுடைய காட்டு-வகை SR-1 புகையிலை நாற்றுகள் 25 μM KAND 11 கொண்ட செங்குத்தாக நிலைநிறுத்தப்பட்ட MS தகடுகளில் வளர்க்கப்பட்டன. (b) இரண்டு வார வயதுடைய காட்டு-வகை SR-1 புகையிலை நாற்றுகள் கிடைமட்ட நிலையில் வளர்க்கப்பட்டன. 200 μM KAND 11. (c) கேம்போர்க் B5 தகடுகளில் KAND 11 இன் குறிப்பிடப்பட்ட செறிவுகளுடன் வளர்க்கப்படும் இரண்டு வார வயதுடைய காட்டு-வகை Tak-1 லிவர்வார்ட் மொட்டுகள். சிவப்பு அம்புகள் இரண்டு வார அடைகாக்கும் போது வளர்ச்சியை நிறுத்திய வித்திகளைக் குறிக்கின்றன. காலம்.(ஈ) ஹெலா செல்களின் செல் பெருக்க மதிப்பீடு.செல் எண்ணிக்கை கிட் 8 (டோஜிண்டோ) ஐப் பயன்படுத்தி நிலையான நேர இடைவெளியில் சாத்தியமான கலங்களின் எண்ணிக்கை அளவிடப்பட்டது.ஒரு கட்டுப்பாட்டாக, HeLa செல்கள் 5 μg/ml ஆக்டினோமைசின் D (Act D) உடன் சிகிச்சையளிக்கப்பட்டன, இது RNA பாலிமரேஸ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷனைத் தடுக்கிறது மற்றும் உயிரணு இறப்பை ஏற்படுத்துகிறது.பகுப்பாய்வுகள் மும்மடங்காக மேற்கொள்ளப்பட்டன.(இ) ஈ. கோலை செல் பெருக்க மதிப்பீடு.ஈ.கோலை வளர்ச்சி OD600 ஐ அளவிடுவதன் மூலம் பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டது.ஒரு கட்டுப்பாட்டாக, செல்கள் 50 μg/ml ஆம்பிசிலின் (Amp) உடன் சிகிச்சையளிக்கப்பட்டன, இது பாக்டீரியா செல் சுவர் தொகுப்பைத் தடுக்கிறது.பகுப்பாய்வுகள் மும்மடங்காக மேற்கொள்ளப்பட்டன.
யூராமைடு தொடர்பான சேர்மங்களால் ஏற்படும் சைட்டோடாக்சிசிட்டியின் செயல்பாட்டின் பொறிமுறையைப் புரிந்து கொள்ள, மிதமான தடுப்பு விளைவுகளுடன் அர்பெனிக் அமிலத்தின் வழித்தோன்றல்களை மறுபரிசீலனை செய்தோம்.படத்தில் காட்டப்பட்டுள்ளபடி.புள்ளிவிவரங்கள் 2b, 6a இல் காட்டப்பட்டுள்ளபடி, அதிக செறிவுகள் (200 μM) உர்மோடோனிக் அமிலம் 6 கொண்ட அகார் தட்டுகளில் வளர்க்கப்படும் நாற்றுகள் குறுகிய மற்றும் இடது வளைந்த வேர்களை (θ = - 23.7 ± 6.1) உற்பத்தி செய்கின்றன, அதேசமயம் கட்டுப்பாட்டு ஊடகத்தில் வளர்க்கப்படும் நாற்றுகள், நாற்றுகள் கிட்டத்தட்ட நேரான வேர்களை உருவாக்குகின்றன (θ = - 3.8 ± 7.1).இந்த குணாதிசயமான சாய்ந்த வளர்ச்சியானது கார்டிகல் நுண்குழாய்களின் செயலிழப்பின் விளைவாக அறியப்படுகிறது14,18.இந்த கண்டுபிடிப்புக்கு இணங்க, மைக்ரோடூபுல்-ஸ்டெபிலைசிங் மருந்துகள் டிஸ்பிராமைடு மற்றும் ஓரிசலின் ஆகியவை நமது வளர்ச்சி நிலைமைகளின் கீழ் இதேபோன்ற வேர் சாய்வைத் தூண்டின (படங்கள். 2b, 6a).அதே நேரத்தில், உர்மோடோனிக் அமில வழித்தோன்றல்களை நாங்கள் சோதித்தோம், மேலும் சில குறிப்பிட்ட செறிவுகளில் சாய்ந்த வேர் வளர்ச்சியைத் தூண்டும் பலவற்றைத் தேர்ந்தெடுத்தோம்.8, 9 மற்றும் 15 கலவைகள் முறையே 75 μM, 50 μM மற்றும் 40 μM இல் வேர் வளர்ச்சியின் திசையை மாற்றியது, இந்த கலவைகள் நுண்குழாய்களை திறம்பட சீர்குலைக்கும் என்பதைக் குறிக்கிறது (படம் 2b, 6a).குறைந்த செறிவில் (15 µM) KAND 11 என்ற மிக சக்திவாய்ந்த உர்சோலிக் அமில வழித்தோன்றலையும் நாங்கள் சோதித்தோம், மேலும் KAND 11 இன் பயன்பாடு வேர் வளர்ச்சியைத் தடுக்கிறது மற்றும் வேர் வளர்ச்சியின் திசையானது சீரற்றதாக இருப்பதைக் கண்டறிந்தோம், இருப்பினும் அவை இடது பக்கம் சாய்ந்தன ( படம் C3)..நுண்குழாய்களை சீர்குலைக்கும் மருந்துகளின் அதிக செறிவுகள் சில சமயங்களில் தாவர வளர்ச்சியைத் தடுப்பதால் வேர் சாய்வதைக் காட்டிலும், ரூட் எபிடெர்மல் செல்களில் உள்ள கார்டிகல் நுண்குழாய்களைக் கவனிப்பதன் மூலம் KAND 11 நுண்குழாய்களைப் பாதிக்கும் சாத்தியத்தை நாங்கள் மதிப்பீடு செய்தோம்.25 μM KAND 11 உடன் சிகிச்சையளிக்கப்பட்ட நாற்று வேர்களின் மேல்தோல் செல்களில் எதிர்ப்பு β-டூபுலின் ஆன்டிபாடிகளைப் பயன்படுத்தி இம்யூனோஹிஸ்டோகெமிஸ்ட்ரி, நீள்வட்ட மண்டலத்தில் உள்ள மேல்தோல் செல்களில் கிட்டத்தட்ட அனைத்து கார்டிகல் நுண்குழாய்களும் காணாமல் போவதைக் காட்டியது (படம். 6b).குமாமோடோனிக் அமிலம் மற்றும் அதன் வழித்தோன்றல்கள் நுண்குழாய்களில் நேரடியாகவோ அல்லது மறைமுகமாகவோ செயல்படுகின்றன, மேலும் இந்த கலவைகள் புதிய நுண்குழாய் தடுப்பான்கள் என்று இந்த முடிவுகள் குறிப்பிடுகின்றன.
அர்சோனிக் அமிலம் மற்றும் அதன் வழித்தோன்றல்கள் அரபிடோப்சிஸ் தலியானாவில் உள்ள கார்டிகல் நுண்குழாய்களை மாற்றுகின்றன.(அ) ​​சுட்டிக்காட்டப்பட்ட செறிவுகளில் பல்வேறு உர்மோடோனிக் அமில வழித்தோன்றல்களின் முன்னிலையில் அளவிடப்படும் ரூட் சாய்வு கோணம்.நுண்குழாய்களைத் தடுக்கும் இரண்டு சேர்மங்களின் விளைவுகளும் பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டன: டிசோபிராமைடு மற்றும் ஓரிசலின்.வேர் வளர்ச்சிக் கோணத்தை அளவிடப் பயன்படுத்தப்படும் தரநிலையை இன்செட் காட்டுகிறது.நட்சத்திரக் குறியீடுகள் போலி சிகிச்சையில் குறிப்பிடத்தக்க வேறுபாடுகளைக் குறிக்கின்றன (டி டெஸ்ட், ப<0.05).n>19. அளவுகோல் = 1 செ.மீ.(ஆ) நீள்வட்ட மண்டலத்தில் உள்ள மேல்தோல் செல்களில் உள்ள கார்டிகல் நுண்குழாய்கள்.25 μM KAND 11 உடன் அல்லது இல்லாமல் MS தட்டுகளில் வளர்க்கப்படும் காட்டு-வகை அரபிடோப்சிஸ் கோல் வேர்களில் உள்ள நுண்குழாய்கள், β-டூபுலின் முதன்மை ஆன்டிபாடிகள் மற்றும் அலெக்சா ஃப்ளூர்-இணைந்த இரண்டாம் நிலை ஆன்டிபாடிகளைப் பயன்படுத்தி இம்யூனோஹிஸ்டோகெமிக்கல் ஸ்டைனிங் மூலம் காட்சிப்படுத்தப்பட்டன.அளவுகோல் = 10 µm.(இ) ரூட் மெரிஸ்டெமில் உள்ள நுண்குழாய்களின் மைட்டோடிக் அமைப்பு.இம்யூனோஹிஸ்டோகெமிக்கல் கறையைப் பயன்படுத்தி மைக்ரோடூபூல்கள் காட்சிப்படுத்தப்பட்டன.ப்ரோபேஸ் மண்டலங்கள், சுழல்கள் மற்றும் ஃபிராக்மோபிளாஸ்ட்கள் உள்ளிட்ட மைட்டோடிக் கட்டமைப்புகள் கன்ஃபோகல் படங்களிலிருந்து கணக்கிடப்பட்டன.அம்புகள் மைட்டோடிக் நுண்குழாய் கட்டமைப்புகளைக் குறிக்கின்றன.நட்சத்திரக் குறியீடுகள் போலி சிகிச்சையில் குறிப்பிடத்தக்க வேறுபாடுகளைக் குறிக்கின்றன (டி டெஸ்ட், ப<0.05).n>9. அளவுகோல் = 50 µm.
உர்சா மைக்ரோடூபுல் செயல்பாட்டை சீர்குலைக்கும் திறனைக் கொண்டிருந்தாலும், அதன் செயல்பாட்டின் வழிமுறை வழக்கமான மைக்ரோடூபுல் டிபோலிமரைசிங் முகவர்களிடமிருந்து வேறுபட்டதாக இருக்கும் என்று எதிர்பார்க்கப்படுகிறது.எடுத்துக்காட்டாக, மைக்ரோடூபுல் டிபாலிமரைசிங் ஏஜெண்டுகளான டிஸ்பிராமைடு மற்றும் ஓரிசலின் ஆகியவை மேல்தோல் செல்களின் அனிசோட்ரோபிக் விரிவாக்கத்தைத் தூண்டுகின்றன, அதேசமயம் KAND 11 இல்லை.கூடுதலாக, KAND 11 மற்றும் disopyramide இன் இணை-பயன்பாடு ஒரு ஒருங்கிணைந்த disopyramide-தூண்டப்பட்ட வேர் வளர்ச்சியை விளைவித்தது மற்றும் KAND 11-தூண்டப்பட்ட வளர்ச்சித் தடை காணப்பட்டது (படம் S4).KAND 11 க்கு மாற்றப்பட்ட மிகை உணர்திறன் டிஸ்பிராமைடு 1-1 (phs1-1) இன் பதிலையும் நாங்கள் பகுப்பாய்வு செய்தோம். phs1-1 ஆனது நியமனமற்ற டூபுலின் கைனேஸ் புள்ளி பிறழ்வைக் கொண்டுள்ளது மற்றும் டிசோபிரமைடு9,20 உடன் சிகிச்சையளிக்கப்படும்போது குறுகிய வேர்களை உருவாக்குகிறது.phs1-1 KAND 11 கொண்ட அகர் ஊடகத்தில் வளர்க்கப்படும் பிறழ்ந்த நாற்றுகள் டிஸ்பிராமிடில் (அத்தி. S5) வளர்க்கப்படுவதைப் போன்ற குறுகிய வேர்களைக் கொண்டிருந்தன.
கூடுதலாக, KAND 11 உடன் சிகிச்சையளிக்கப்பட்ட நாற்றுகளின் வேர் மெரிஸ்டெமில் புரோபேஸ் மண்டலங்கள், சுழல்கள் மற்றும் ஃபிராக்மோபிளாஸ்ட்கள் போன்ற மைட்டோடிக் நுண்குழாய் கட்டமைப்புகளை நாங்கள் கவனித்தோம். CDKB2;1p::CDKB2;1-GUS க்கான அவதானிப்புகளுக்கு இணங்க, குறிப்பிடத்தக்க குறைவு மைட்டோடிக் நுண்குழாய்களின் எண்ணிக்கை காணப்பட்டது (படம் .6c).
துணை செல் தெளிவுத்திறனில் KAND 11 இன் சைட்டோடாக்சிசிட்டியை வகைப்படுத்த, KAND 11 உடன் புகையிலை BY-2 இடைநீக்க கலங்களுக்கு சிகிச்சை அளித்து அவற்றின் பதிலைக் கவனித்தோம்.கார்டிகல் நுண்குழாய்களில் KAND 11 இன் விளைவை மதிப்பிடுவதற்கு, நுண்குழாய்களை ஒளிரும் லேபிள் செய்யும் TagRFP-TUA6 ஐ வெளிப்படுத்தும் KAND 11 ஐ BY-2 கலங்களில் முதலில் சேர்த்தோம்.பட பகுப்பாய்வைப் பயன்படுத்தி கார்டிகல் மைக்ரோடூபுல் அடர்த்தி மதிப்பிடப்பட்டது, இது சைட்டோபிளாஸ்மிக் பிக்சல்களில் சைட்டோஸ்கெலிட்டல் பிக்சல்களின் சதவீதத்தை அளவிடுகிறது.1 மணிநேரத்திற்கு 50 μM அல்லது 100 μM KAND 11 உடன் சிகிச்சைக்குப் பிறகு, அடர்த்தியானது முறையே 0.94 ± 0.74% அல்லது 0.23 ± 0.28% ஆகக் குறைந்துள்ளது, அதே சமயம் DMSO உடன் சிகிச்சை செய்யப்பட்ட செல்களின் அடர்த்தியானது 4.6 ± 4 ஆக இருந்தது. % (படம் 7a).KAND 11 சிகிச்சையானது கார்டிகல் நுண்குழாய்களின் டிபோலிமரைசேஷனைத் தூண்டுகிறது (படம் 6b) என்ற அரபிடோப்சிஸில் உள்ள கவனிப்புடன் இந்த முடிவுகள் ஒத்துப்போகின்றன.KAND 11 இன் அதே செறிவுடன் சிகிச்சையின் பின்னர் GFP-ABD-லேபிளிடப்பட்ட ஆக்டின் இழைகளுடன் BY-2 வரியை ஆய்வு செய்தோம், மேலும் KAND 11 சிகிச்சையானது ஆக்டின் இழைகளை சீர்குலைப்பதைக் கவனித்தோம்.1 மணிநேரத்திற்கு 50 μM அல்லது 100 μM KAND 11 உடன் சிகிச்சையானது ஆக்டின் இழை அடர்த்தியை முறையே 1.20 ± 0.62% அல்லது 0.61 ± 0.26% ஆகக் குறைத்தது, அதேசமயம் DMSO-சிகிச்சையளிக்கப்பட்ட கலங்களில் அடர்த்தி ± 1% ஆக இருந்தது (படம். 2% 1.69).7b).இந்த முடிவுகள் ஆக்டின் இழைகளைப் பாதிக்காத ப்ராபிசமைடு மற்றும் நுண்குழாய்களைப் பாதிக்காத ஆக்டின் டிபோலிமரைசரான லாட்ரன்குலின் பி (SI படம் S6) ஆகியவற்றின் விளைவுகளுடன் முரண்படுகின்றன.கூடுதலாக, கூமமோனமைடு 1, கூமமோனமைடு அமிலம் 6 அல்லது KAND 11 உடன் சிகிச்சை ஹெலா செல்களில் உள்ள நுண்குழாய்களைப் பாதிக்கவில்லை (SI படம் S7).எனவே, KAND 11 இன் செயல்பாட்டின் பொறிமுறையானது அறியப்பட்ட சைட்டோஸ்கெலட்டன் சீர்குலைப்பிலிருந்து வேறுபட்டதாக நம்பப்படுகிறது.கூடுதலாக, KAND 11 உடன் சிகிச்சையளிக்கப்பட்ட BY-2 செல்களை எங்கள் நுண்ணிய அவதானிப்பு KAND 11 சிகிச்சையின் போது உயிரணு இறப்பின் தொடக்கத்தை வெளிப்படுத்தியது மற்றும் KAND 11 சிகிச்சையின் 30 நிமிடங்களுக்குப் பிறகு Evans நீல நிறக் கறை படிந்த இறந்த செல்களின் விகிதம் கணிசமாக அதிகரிக்கவில்லை என்பதைக் காட்டுகிறது. 50 μM அல்லது 100 μM KAND உடன் 90 நிமிட சிகிச்சைக்குப் பிறகு, இறந்த உயிரணுக்களின் எண்ணிக்கை முறையே 43.7% அல்லது 80.1% ஆக அதிகரித்தது (படம் 7c).ஒன்றாக எடுத்துக்கொண்டால், நாவல் உர்சோலிக் அமிலத்தின் வழித்தோன்றல் KAND 11 என்பது முன்னர் அறியப்படாத செயல்பாட்டின் ஒரு தாவர-குறிப்பிட்ட சைட்டோஸ்கெலிட்டல் தடுப்பானாகும்.
KAND கார்டிகல் நுண்குழாய்கள், ஆக்டின் இழைகள் மற்றும் புகையிலை BY-2 செல்களின் நம்பகத்தன்மையை பாதிக்கிறது.(அ) ​​TagRFP-TUA6 முன்னிலையில் BY-2 கலங்களில் கார்டிகல் நுண்குழாய்களின் காட்சிப்படுத்தல்.KAND 11 (50 μM அல்லது 100 μM) அல்லது DMSO உடன் சிகிச்சையளிக்கப்பட்ட BY-2 செல்கள் கன்ஃபோகல் மைக்ரோஸ்கோபி மூலம் ஆய்வு செய்யப்பட்டன.கார்டிகல் மைக்ரோடூபுல் அடர்த்தி 25 சுயாதீன செல்களின் மைக்ரோகிராஃப்களிலிருந்து கணக்கிடப்பட்டது.கடிதங்கள் குறிப்பிடத்தக்க வேறுபாடுகளைக் குறிக்கின்றன (டுகே HSD சோதனை, ப<0.05).அளவுகோல் = 10 µm.(ஆ) GFP-ABD2 முன்னிலையில் காட்சிப்படுத்தப்பட்ட BY-2 கலங்களில் உள்ள கார்டிகல் ஆக்டின் இழைகள்.KAND 11 (50 μM அல்லது 100 μM) அல்லது DMSO உடன் சிகிச்சையளிக்கப்பட்ட BY-2 செல்கள் கன்ஃபோகல் மைக்ரோஸ்கோபி மூலம் ஆய்வு செய்யப்பட்டன.கார்டிகல் ஆக்டின் இழைகளின் அடர்த்தி 25 சுயாதீன செல்களின் மைக்ரோகிராஃப்களில் இருந்து கணக்கிடப்பட்டது.கடிதங்கள் குறிப்பிடத்தக்க வேறுபாடுகளைக் குறிக்கின்றன (டுகே HSD சோதனை, ப<0.05).அளவுகோல் = 10 µm.(c) இறந்த BY-2 செல்களை எவன்ஸ் ப்ளூ ஸ்டைனிங் மூலம் அவதானித்தல்.KAND 11 (50 μM அல்லது 100 μM) அல்லது DMSO உடன் சிகிச்சையளிக்கப்பட்ட BY-2 செல்கள் பிரகாசமான புல நுண்ணோக்கி மூலம் ஆய்வு செய்யப்பட்டன.n=3.அளவுகோல் = 100 μm.
புதிய இயற்கை பொருட்களின் கண்டுபிடிப்பு மற்றும் பயன்பாடு மருத்துவம் மற்றும் விவசாயம் உட்பட மனித வாழ்வின் பல்வேறு அம்சங்களில் குறிப்பிடத்தக்க முன்னேற்றங்களுக்கு வழிவகுத்தது.இயற்கை வளங்களிலிருந்து பயனுள்ள சேர்மங்களைப் பெற வரலாற்று ஆராய்ச்சி மேற்கொள்ளப்பட்டுள்ளது.குறிப்பாக, ஆக்டினோமைசீட்டுகள் நூற்புழுக்களுக்கு ஆன்டிபராசிடிக் நுண்ணுயிர் எதிர்ப்பிகளாக அறியப்படுகின்றன, ஏனெனில் அவை அவெர்மெக்டின், ஐவர்மெக்டின் மற்றும் ப்ளூமைசின் ஆகியவற்றின் ஈய கலவை மற்றும் அதன் வழித்தோன்றல்கள் போன்ற பல்வேறு இரண்டாம் நிலை வளர்சிதை மாற்றங்களை உற்பத்தி செய்யும் திறன் காரணமாக அவை புற்றுநோய் எதிர்ப்பு முகவராகப் பயன்படுத்தப்படுகின்றன.அதேபோல், ஆக்டினோமைசீட்களிலிருந்து பல்வேறு களைக்கொல்லி கலவைகள் கண்டுபிடிக்கப்பட்டுள்ளன, அவற்றில் சில ஏற்கனவே வணிக ரீதியாகப் பயன்படுத்தப்படுகின்றன 1,23.எனவே, ஆக்டினோமைசீட் வளர்சிதை மாற்றங்களின் பகுப்பாய்வு, விரும்பிய உயிரியல் செயல்பாடுகளுடன் இயற்கை தயாரிப்புகளை தனிமைப்படுத்துவது ஒரு பயனுள்ள உத்தியாகக் கருதப்படுகிறது.இந்த ஆய்வில், எஸ். வெரான்சிஸிலிருந்து கூமமோனமைடு என்ற புதிய சேர்மத்தைக் கண்டுபிடித்து அதை வெற்றிகரமாக ஒருங்கிணைத்தோம்.உர்சோனிக் அமிலம் என்பது உர்பெனமைடு மற்றும் அதன் வழித்தோன்றல்களின் செயற்கை இடைநிலை ஆகும்.இது குணாதிசயமான வேர் சுருட்டை ஏற்படுத்தலாம், மிதமான மற்றும் வலுவான களைக்கொல்லி செயல்பாட்டை வெளிப்படுத்தும் மற்றும் நேரடியாகவோ அல்லது மறைமுகமாகவோ தாவர நுண்குழாய்களை சேதப்படுத்தும்.இருப்பினும், உர்மோடோனிக் அமிலத்தின் செயல்பாட்டின் பொறிமுறையானது தற்போதுள்ள நுண்குழாய் தடுப்பான்களில் இருந்து வேறுபடலாம், ஏனெனில் KAND 11 ஆக்டின் இழைகளை சீர்குலைத்து உயிரணு இறப்பை ஏற்படுத்துகிறது, இது உர்மோடோனிக் அமிலம் மற்றும் அதன் வழித்தோன்றல்கள் பரந்த அளவிலான சைட்டோஸ்கெலிட்டல் கட்டமைப்புகளை பாதிக்கும் ஒரு ஒழுங்குமுறை பொறிமுறையை பரிந்துரைக்கிறது..
உர்பெனோனிக் அமிலத்தின் மேலும் விரிவான குணாதிசயங்கள், அர்பெனோனிக் அமிலத்தின் செயல்பாட்டின் பொறிமுறையை நன்கு புரிந்துகொள்ள உதவும்.குறிப்பாக, உர்சோனிக் அமிலம் மற்றும் அதன் வழித்தோன்றல்கள் நுண்குழாய்களில் நேரடியாகச் செயல்படுகின்றனவா மற்றும் அவற்றை டிபாலிமரைஸ் செய்கின்றனவா அல்லது அவற்றின் செயல் நுண்குழாய் சீர்குலைவை ஏற்படுத்துமா என்பதை தீர்மானிக்க, குறைக்கப்பட்ட நுண்குழாய்களுடன் பிணைக்கும் உர்சோனிக் அமிலத்தின் திறனை மதிப்பிடுவதே அடுத்த இலக்காகும்.கூடுதலாக, நுண்குழாய்கள் நேரடி இலக்காக இல்லாத நிலையில், தாவர உயிரணுக்களில் உர்சோனிக் அமிலத்தின் செயல்பாட்டின் தளம் மற்றும் மூலக்கூறு இலக்குகளை அடையாளம் காண்பது, தொடர்புடைய சேர்மங்களின் பண்புகள் மற்றும் களைக்கொல்லி செயல்பாட்டை மேம்படுத்துவதற்கான சாத்தியமான வழிகளை மேலும் புரிந்துகொள்ள உதவும்.எங்களுடைய உயிரியல் செயல்பாடு மதிப்பீடு, அரபிடோப்சிஸ் தலியானா, புகையிலை மற்றும் லிவர்வார்ட் போன்ற தாவரங்களின் வளர்ச்சியில் உர்சோனிக் அமிலத்தின் தனித்துவமான சைட்டோடாக்ஸிக் திறனை வெளிப்படுத்தியது, அதே நேரத்தில் ஈ.கோலை அல்லது ஹெலா செல்கள் பாதிக்கப்படவில்லை.உர்சோனிக் அமில வழித்தோன்றல்கள் திறந்த விவசாய நிலங்களில் பயன்படுத்த களைக்கொல்லிகளாக உருவாக்கப்பட்டால், விலங்குகளின் உயிரணுக்களுக்கு நச்சுத்தன்மை குறைவாகவோ அல்லது நச்சுத்தன்மையற்றதாகவோ உள்ளது.உண்மையில், நுண்குழாய்கள் யூகாரியோட்டுகளில் பொதுவான கட்டமைப்புகளாக இருப்பதால், தாவரங்களில் அவற்றின் தேர்ந்தெடுக்கப்பட்ட தடுப்பு களைக்கொல்லிகளுக்கு ஒரு முக்கிய தேவையாகும்.எடுத்துக்காட்டாக, புரோபிசமைடு, நுண்குழாய் டிபாலிமரைசிங் முகவர், இது நேரடியாக டூபுலினுடன் பிணைக்கிறது மற்றும் பாலிமரைசேஷனைத் தடுக்கிறது, இது விலங்கு உயிரணுக்களுக்கு குறைந்த நச்சுத்தன்மையின் காரணமாக களைக்கொல்லியாகப் பயன்படுத்தப்படுகிறது24.டிசோபிராமைடுக்கு மாறாக, தொடர்புடைய பென்சமைடுகள் வெவ்வேறு இலக்கு விவரக்குறிப்புகளைக் கொண்டுள்ளன.தாவர நுண்குழாய்களுடன் கூடுதலாக, RH-4032 அல்லது பென்சாக்சமைடு முறையே விலங்கு செல்கள் அல்லது ஓமைசீட்களின் நுண்குழாய்களைத் தடுக்கிறது, மேலும் ஜலிலாமைடு அதன் குறைந்த பைட்டோடாக்சிசிட்டி25,26,27 காரணமாக பூஞ்சைக் கொல்லியாகப் பயன்படுத்தப்படுகிறது.புதிதாக கண்டுபிடிக்கப்பட்ட கரடி மற்றும் அதன் வழித்தோன்றல்கள் தாவரங்களுக்கு எதிராக தேர்ந்தெடுக்கப்பட்ட சைட்டோடாக்சிசிட்டியை வெளிப்படுத்துகின்றன, ஆனால் மேலும் மாற்றங்கள் அவற்றின் இலக்கு குறிப்பை மாற்றக்கூடும், இது நோய்க்கிருமி பூஞ்சை அல்லது ஓமைசீட்களைக் கட்டுப்படுத்த கூடுதல் வழித்தோன்றல்களை வழங்கக்கூடும் என்பது குறிப்பிடத்தக்கது.
உர்பெனோனிக் அமிலத்தின் தனித்துவமான பண்புகள் மற்றும் அதன் வழித்தோன்றல்கள் களைக்கொல்லிகளாகவும் ஆராய்ச்சி கருவிகளாகவும் அவற்றின் வளர்ச்சிக்கு பயனுள்ளதாக இருக்கும்.தாவர செல் வடிவத்தைக் கட்டுப்படுத்துவதில் சைட்டோஸ்கெலட்டனின் முக்கியத்துவம் பரவலாக அங்கீகரிக்கப்பட்டுள்ளது.மார்போஜெனீசிஸை சரியாகக் கட்டுப்படுத்த மைக்ரோடூபுல் இயக்கவியலைக் கட்டுப்படுத்துவதன் மூலம் கார்டிகல் மைக்ரோடூபுல் அமைப்பின் சிக்கலான வழிமுறைகளை தாவரங்கள் உருவாக்கியுள்ளன என்று முந்தைய ஆய்வுகள் காட்டுகின்றன.நுண்குழாய் செயல்பாட்டைக் கட்டுப்படுத்துவதற்குப் பொறுப்பான ஏராளமான மூலக்கூறுகள் அடையாளம் காணப்பட்டுள்ளன, மேலும் அது தொடர்பான ஆராய்ச்சி இன்னும் நடந்து கொண்டிருக்கிறது3,4,28.தாவர உயிரணுக்களில் மைக்ரோடூபுல் இயக்கவியல் பற்றிய நமது தற்போதைய புரிதல் கார்டிகல் மைக்ரோடூபுல் அமைப்பின் வழிமுறைகளை முழுமையாக விளக்கவில்லை.எடுத்துக்காட்டாக, டிசோபிரமைடு மற்றும் ஓரிசலின் இரண்டும் நுண்குழாய்களை டிபோலிமரைஸ் செய்ய முடியும் என்றாலும், டிசோபிரமைடு கடுமையான வேர் சிதைவை ஏற்படுத்துகிறது, அதே சமயம் ஓரிசலின் ஒப்பீட்டளவில் லேசான விளைவைக் கொண்டிருக்கிறது.மேலும், நுண்குழாய்களை உறுதிப்படுத்தும் டூபுலினில் உள்ள பிறழ்வுகள், வேர்களில் டெக்ஸ்ட்ரோரோடேஷனையும் ஏற்படுத்துகின்றன, அதேசமயம் மைக்ரோடூபுல் இயக்கவியலையும் உறுதிப்படுத்தும் பக்லிடாக்சல், அவ்வாறு செய்யாது.எனவே, உர்சோலிக் அமிலத்தின் மூலக்கூறு இலக்குகளை ஆய்வு செய்து அடையாளம் காண்பது தாவர கார்டிகல் நுண்குழாய்களை ஒழுங்குபடுத்துவதற்கான புதிய நுண்ணறிவுகளை வழங்க வேண்டும்.அதேபோல், சிதைந்த வளர்ச்சியை ஊக்குவிப்பதில் திறம்பட செயல்படும் ரசாயனங்களின் எதிர்கால ஒப்பீடுகளான டிஸ்பிராமைடு, மற்றும் ஓரிசலின் அல்லது குமமோடோரிக் அமிலம் போன்ற குறைவான செயல்திறன் கொண்ட இரசாயனங்கள், சிதைந்த வளர்ச்சி எவ்வாறு நிகழ்கிறது என்பதற்கான தடயங்களை வழங்கும்.
மறுபுறம், பாதுகாப்பு தொடர்பான சைட்டோஸ்கெலிட்டல் மறுசீரமைப்புகள் உர்சோனிக் அமிலத்தின் சைட்டோடாக்சிசிட்டியை விளக்க மற்றொரு வாய்ப்பாகும்.ஒரு நோய்க்கிருமியின் தொற்று அல்லது தாவர உயிரணுக்களில் ஒரு எலிசிட்டரை அறிமுகப்படுத்துவது சில சமயங்களில் சைட்டோஸ்கெலட்டனின் அழிவையும் அதைத் தொடர்ந்து உயிரணு இறப்பையும் ஏற்படுத்துகிறது.எடுத்துக்காட்டாக, ஓமைசீட்-பெறப்பட்ட கிரிப்டோக்சாந்தின், KAND சிகிச்சையில் ஏற்படுவதைப் போலவே, புகையிலை உயிரணு இறப்பதற்கு முன் நுண்குழாய்கள் மற்றும் ஆக்டின் இழைகளை சீர்குலைப்பதாக அறிவிக்கப்பட்டுள்ளது.பாதுகாப்பு பதில்கள் மற்றும் உர்சோனிக் அமிலத்தால் தூண்டப்பட்ட செல்லுலார் பதில்களுக்கு இடையே உள்ள ஒற்றுமைகள், அவை பொதுவான செல்லுலார் செயல்முறைகளைத் தூண்டும் என்று அனுமானிக்க வழிவகுத்தது, இருப்பினும் கிரிப்டோக்சாந்தினை விட உர்சோனிக் அமிலத்தின் வேகமான மற்றும் வலுவான விளைவு தெளிவாகத் தெரிகிறது.இருப்பினும், ஆக்டின் இழைகளின் இடையூறு தன்னிச்சையான உயிரணு இறப்பை ஊக்குவிக்கிறது என்று ஆய்வுகள் காட்டுகின்றன, இது எப்போதும் நுண்குழாய் இடையூறுடன் இருக்காது.கூடுதலாக, உர்சோனிக் அமிலத்தின் வழித்தோன்றல்கள் செய்வது போல, நோய்க்கிருமி அல்லது எலிசிட்டர் சிதைந்த வேர் வளர்ச்சியை ஏற்படுத்துமா என்பதைப் பார்க்க வேண்டும்.எனவே, பாதுகாப்பு பதில்களையும் சைட்டோஸ்கெலட்டனையும் இணைக்கும் மூலக்கூறு அறிவு கவனிக்கப்பட வேண்டிய ஒரு கவர்ச்சிகரமான பிரச்சனையாகும்.உர்சோனிக் அமிலத்துடன் தொடர்புடைய குறைந்த மூலக்கூறு எடை சேர்மங்கள் மற்றும் பல்வேறு ஆற்றல்களைக் கொண்ட வழித்தோன்றல்களின் இருப்பைப் பயன்படுத்துவதன் மூலம், அவை அறியப்படாத செல்லுலார் வழிமுறைகளை குறிவைப்பதற்கான வாய்ப்புகளை வழங்கலாம்.
ஒன்றாக எடுத்துக்கொண்டால், நுண்குழாய் இயக்கவியலை மாற்றியமைக்கும் புதிய சேர்மங்களின் கண்டுபிடிப்பு மற்றும் பயன்பாடு தாவர செல் வடிவ நிர்ணயத்தின் அடிப்படையிலான சிக்கலான மூலக்கூறு வழிமுறைகளை நிவர்த்தி செய்வதற்கான சக்திவாய்ந்த முறைகளை வழங்கும்.இந்த சூழலில், சமீபத்தில் உருவாக்கப்பட்ட உர்மோடோனிக் அமிலம், நுண்குழாய்கள் மற்றும் ஆக்டின் இழைகளை பாதிக்கிறது மற்றும் உயிரணு இறப்பைத் தூண்டுகிறது, இது நுண்குழாய் கட்டுப்பாடு மற்றும் இந்த பிற வழிமுறைகளுக்கு இடையேயான தொடர்பைப் புரிந்துகொள்ள ஒரு வாய்ப்பை வழங்கலாம்.எனவே, உர்பெனோனிக் அமிலத்தைப் பயன்படுத்தி வேதியியல் மற்றும் உயிரியல் பகுப்பாய்வு தாவர சைட்டோஸ்கெலட்டனைக் கட்டுப்படுத்தும் மூலக்கூறு ஒழுங்குமுறை வழிமுறைகளைப் புரிந்துகொள்ள உதவும்.
2% (w/v) கேலக்டோஸ், 2% (w/v) எசன்ஸ் பேஸ்ட், 1% (w/v) பேக்டோ கலவை கொண்ட 110 மிலி விதை ஊடகம் கொண்ட 500 மிலி தடை செய்யப்பட்ட எர்லென்மேயர் குடுவையில் S. வெரான்சிஸ் MK493-CF1 ஐ தடுப்பூசி போடவும். .-soyton (Thermo Fisher Scientific, Inc.), 0.5% (w/v) சோள சாறு (KOGOSTCH Co., Ltd., Japan), 0.2% (w/v) (NH4)2SO4 மற்றும் 0.2% CaCO3 டீயோனைஸ்டு நீரில்.கருத்தடை செய்வதற்கு முன் pH 7.4).விதை கலாச்சாரங்கள் ஒரு ரோட்டரி ஷேக்கரில் (180 ஆர்பிஎம்) 27 டிகிரி செல்சியஸ் வெப்பநிலையில் 2 நாட்களுக்கு அடைக்கப்பட்டுள்ளன.திட நிலை நொதித்தல் மூலம் உற்பத்தி சாகுபடி.விதை வளர்ப்பு (7 மில்லி) 500 மில்லி K-1 பிளாஸ்கில் மாற்றப்பட்டது, இதில் 40 கிராம் உற்பத்தி ஊடகம் 15 கிராம் அழுத்தப்பட்ட பார்லி (MUSO Co. Ltd., ஜப்பான்) மற்றும் 25 கிராம் டீயோனைஸ்டு நீர் (pH சரிசெய்யப்படவில்லை. கருத்தடைக்கு முன்).)நொதித்தல் 14 நாட்களுக்கு இருட்டில் 30 ° C இல் மேற்கொள்ளப்பட்டது.நொதித்தல் பொருள் 40 மில்லி/பாட்டில் EtOH உடன் பிரித்தெடுக்கப்பட்டது மற்றும் மையவிலக்கு (1500 கிராம், 4 ° C, 10 நிமிடம்).கலாச்சார சூப்பர்நேட்டண்ட் (60 மில்லி) 10% MeOH/EtOAc கலவையுடன் பிரித்தெடுக்கப்பட்டது.கரிம அடுக்கு ஒரு எச்சத்தை (59.5 மி.கி.) பெற குறைந்த அழுத்தத்தின் கீழ் ஆவியாகி, இது ஹெச்.பி.எல்.சி.க்கு கிரேடியன்ட் எலுஷன் (0–10 நிமிடங்கள்: 90%) ஒரு தலைகீழ் கட்ட நெடுவரிசையில் (SHISEIDO CAPCELL PAK C18 UG120, 5 μm, ID) உட்படுத்தப்பட்டது. 10 மிமீ × நீளம் 250 மிமீ) H2O/CH3CN, 10-35 நிமிடங்கள்: 90% H2O/CH3CN முதல் 70% H2O/CH3CN (கிரேடியன்ட்), 35-45 நிமிடங்கள்: 90% H2O/EtOH, 45-155 நிமிடங்கள்: 90% H2O /EtOH முதல் 100% EtOH (கிரேடியன்ட் (கிரேடியன்ட்), 155-200 நிமிடம்: 100% EtOH) 1.5 மிலி/நிமிட ஓட்ட விகிதத்தில், கூமமோனமைடு (1, 36.0 மி.கி.) ஒரு வெள்ளை உருவமற்ற தூளாக தனிமைப்படுத்தப்பட்டது.
குமாமோடோமைடு(1);1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 6.93 (t, J = 2.5 Hz, 1H), 6.76 (dd, J = 4.3, 1.8 Hz 1H), 6.05 (t , J = 3.8 Hz, 1H).), 4.08 (s, 3H);13C-NMR (125 MHz, CDCl3) δ 161.1, 121.0, 119.9, 112.2, 105.0, 68.3;ESI-HRMS [M+H]+: [C6H9N2O2]+ கணக்கிடப்பட்ட மதிப்பு: 141.0659, அளவிடப்பட்ட மதிப்பு: 141.0663, IR νmax 3451, 3414, 3173, 2938, 1603, 153973 செ.மீ., 1.
கொலம்பியா விதைகள் (Col-0) ஆராய்ச்சி பயன்பாட்டிற்கான அனுமதியுடன் அரபிடோப்சிஸ் உயிரியல் வள மையத்திலிருந்து (ABRC) பெறப்பட்டது.Col-0 விதைகள் எங்கள் ஆய்வக நிலைமைகளின் கீழ் பரப்பப்பட்டு பராமரிக்கப்பட்டு காட்டு-வகை அரபிடோப்சிஸ் தாவரங்களாகப் பயன்படுத்தப்பட்டன.அரபிடோப்சிஸ் விதைகள் மேற்பரப்பு கிருமி நீக்கம் செய்யப்பட்டு அரை-பலம் கொண்ட முராஷிகே மற்றும் ஸ்கூக் ஊடகத்தில் 2% சுக்ரோஸ் (புஜிஃபில்ம் வாகோ தூய கெமிக்கல்), 0.05% (w/v) 2-(4-மார்போலினோ) எத்தனெசல்போனிக் அமிலம் (MES) (Fujifilm Wako Pure Chemical) கொண்டவை. )) மற்றும் 1.5% அகார் (Fujifilm Wako Pure Chemical), pH 5.7, 23 °C மற்றும் நிலையான ஒளி.phs1-1 விகாரத்தின் விதைகள் T. ஹாஷிமோட்டோ (நாரா அறிவியல் மற்றும் தொழில்நுட்ப நிறுவனம்) மூலம் வழங்கப்பட்டது.
டி. ஹாஷிமோட்டோ (நாரா இன்ஸ்டிடியூட் ஆஃப் சயின்ஸ் அண்ட் டெக்னாலஜி) மூலம் எஸ்ஆர்-1 என்ற திரிபு விதைகள் வழங்கப்பட்டன மற்றும் காட்டு வகை புகையிலை தாவரங்களாகப் பயன்படுத்தப்பட்டன.புகையிலை விதைகள் மேற்பரப்பு கிருமி நீக்கம் செய்யப்பட்டு, முளைப்பதை ஊக்குவிப்பதற்காக மலட்டு நீரில் மூன்று இரவுகள் ஊறவைக்கப்பட்டன, பின்னர் 2% சுக்ரோஸ், 0.05% (w/v) MES மற்றும் 0.8% ஜெல்லன் கம் (Fujifilm Wako Pure Chemical) ஆகியவற்றைக் கொண்ட அரை வலிமையான கரைசலில் வைக்கப்பட்டது. முராஷிகே.மற்றும் ஸ்கூக் மீடியம்) pH 5.7 மற்றும் நிலையான ஒளியின் கீழ் 23°C இல் அடைகாக்கப்படுகிறது.
ஸ்ட்ரெய்ன் டாக்-1 டி. கோச்சி (கியோட்டோ பல்கலைக்கழகம்) மூலம் வழங்கப்பட்டது மற்றும் லிவர்வார்ட் ஆய்வுக்கான நிலையான சோதனை அலகு பயன்படுத்தப்பட்டது.கிருமி நீக்கம் செய்யப்பட்ட வளர்ப்புத் தாவரங்களிலிருந்து ஜெம்மா பெறப்பட்டது, பின்னர் 1% சுக்ரோஸ் மற்றும் 0.3% ஜெல்லன் கம் ஆகியவற்றைக் கொண்ட கேம்போர்க் பி5 மீடியத்தில் (புஜிஃபில்ம் வாகோ ப்யூர் கெமிக்கல்) பூசப்பட்டு, தொடர்ச்சியான வெளிச்சத்தில் 23 டிகிரி செல்சியஸ் வெப்பநிலையில் அடைகாக்கப்பட்டது.
புகையிலை BY-2 செல்கள் (Nicotiana tabacum L. cv. Bright Yellow 2) S. Hasezawa (டோக்கியோ பல்கலைக்கழகம்) மூலம் வழங்கப்பட்டது.BY-2 செல்கள் மாற்றியமைக்கப்பட்ட Linsmeier மற்றும் Skoog ஊடகத்தில் 95 மடங்கு நீர்த்தப்பட்டு, வாரந்தோறும் 2,4-dichlorophenoxyacetic அமிலம் 32 உடன் கூடுதலாக வழங்கப்பட்டது.செல் இடைநீக்கம் இருட்டில் 27 டிகிரி செல்சியஸ் வெப்பநிலையில் 130 ஆர்பிஎம்மில் ரோட்டரி ஷேக்கரில் கலக்கப்பட்டது.புதிய ஊடகத்தை விட 10 மடங்கு அளவு கொண்ட செல்களைக் கழுவி, அதே ஊடகத்தில் மீண்டும் இணைக்கவும்.நுண்குழாய் குறிப்பான் TagRFP-TUA6 அல்லது காலிஃபிளவர் மொசைக் வைரஸ் 35S ஊக்குவிப்பாளரின் கீழ் ஆக்டின் ஃபிலமென்ட் மார்க்கர் GFP-ABD2 ஐ நிலையாக வெளிப்படுத்தும் BY-2 டிரான்ஸ்ஜெனிக் செல் கோடுகள் விவரிக்கப்பட்டுள்ளபடி உருவாக்கப்பட்டது33,34,35.இந்த செல் கோடுகள் அசல் BY-2 செல் லைனுக்குப் பயன்படுத்தப்பட்டதைப் போன்ற நடைமுறைகளைப் பயன்படுத்தி பராமரிக்கப்பட்டு ஒத்திசைக்கப்படலாம்.
ஹெலா செல்கள் டல்பெக்கோவின் மாற்றியமைக்கப்பட்ட ஈகிள் மீடியத்தில் (டிஎம்இஎம்) (லைஃப் டெக்னாலஜிஸ்) 10% கரு போவின் சீரம், 1.2 யூ/மிலி பென்சிலின் மற்றும் 1.2 μg/மிலி ஸ்ட்ரெப்டோமைசின் ஆகியவற்றுடன் 37°C இன்குபேட்டரில் 37°C இன்குபேட்டரில் வளர்க்கப்பட்டன.
இந்த கையெழுத்துப் பிரதியில் விவரிக்கப்பட்டுள்ள அனைத்து சோதனைகளும் ஜப்பானிய உயிர் பாதுகாப்பு விதிமுறைகள் மற்றும் வழிகாட்டுதல்களின்படி செய்யப்பட்டன.
சேர்மங்கள் டைமெதில் சல்பாக்சைடில் (DMSO; Fujifilm Wako Pure Chemical) கரைக்கப்பட்டது மற்றும் MS ஊடகத்தில் அரபிடோப்சிஸ் மற்றும் புகையிலை அல்லது லிவர்வார்ட்டுக்கான கேம்போர்க் B5 ஊடகத்தில் நீர்த்தப்பட்டது.வேர் வளர்ச்சி தடுப்பு மதிப்பீட்டிற்காக, ஒரு தட்டில் 10க்கும் மேற்பட்ட விதைகள் அகர் ஊடகத்தில் குறிப்பிடப்பட்ட கலவைகள் அல்லது DMSO ஐக் கொண்டதாக விதைக்கப்பட்டது.விதைகள் 7 நாட்களுக்கு வளர்ச்சி அறையில் அடைக்கப்பட்டுள்ளன.நாற்றுகள் புகைப்படம் எடுக்கப்பட்டு வேர்களின் நீளம் அளவிடப்பட்டது.அரபிடோப்சிஸ் முளைப்பு மதிப்பீட்டிற்காக, ஒரு தட்டில் 48 விதைகள் 200 μM கலவை அல்லது DMSO கொண்ட அகர் ஊடகத்தில் விதைக்கப்பட்டது.அரபிடோப்சிஸ் விதைகள் வளர்ச்சி அறையில் வளர்க்கப்பட்டு, முளைத்த 7 நாட்களுக்குப் பிறகு முளைத்த நாற்றுகளின் எண்ணிக்கை கணக்கிடப்பட்டது (டாக்).புகையிலை முளைக்கும் மதிப்பீட்டிற்காக, ஒரு தட்டில் 24 விதைகள் 200 μM KAND அல்லது DMSO கொண்ட அகர் ஊடகத்தில் விதைக்கப்பட்டது.ஒரு வளர்ச்சி அறையில் புகையிலை விதைகள் வளர்க்கப்பட்டு, 14 நாட்களுக்குப் பிறகு முளைத்த நாற்றுகளின் எண்ணிக்கை கணக்கிடப்பட்டது.லிவர்வார்ட் வளர்ச்சி தடுப்பு மதிப்பீட்டிற்கு, ஒவ்வொரு தட்டில் இருந்தும் 9 கருக்கள் அகர் ஊடகத்தில் KAND அல்லது DMSO இன் குறிப்பிடப்பட்ட செறிவுகளைக் கொண்ட பூசப்பட்டு 14 நாட்களுக்கு வளர்ச்சி அறையில் அடைகாத்தன.
ரூட் மெரிஸ்டெம் அமைப்பைக் காட்சிப்படுத்த 5 மி.கி/மிலி ப்ரோபிடியம் அயோடைடு (PI) படிந்த நாற்றுகளைப் பயன்படுத்தவும்.டிசிஎஸ் எஸ்பிஇ கன்ஃபோகல் லேசர் ஸ்கேனிங் மைக்ரோஸ்கோப்பை (லைகா மைக்ரோசிஸ்டம்ஸ்) பயன்படுத்தி ஃப்ளோரசன்ஸ் நுண்ணோக்கி மூலம் பிஐ சிக்னல்கள் காணப்பட்டன.
மலாமி மற்றும் Benfey36 விவரித்த நெறிமுறையின்படி β-குளுகுரோனிடேஸ் (GUS) உடன் வேர்களின் ஹிஸ்டோகெமிக்கல் கறை படிதல் செய்யப்பட்டது.நாற்றுகள் ஒரே இரவில் 90% அசிட்டோனில் சரி செய்யப்பட்டு, 0.5 mg/ml 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-d-glucuronic அமிலம் GUS பஃபரில் 1 மணிநேரம் கறைபட்டு, நீரேற்றப்பட்ட குளோரால்டிஹைட் கரைசலில் வைக்கப்பட்டது.(8 கிராம் குளோரல் ஹைட்ரேட், 2 மில்லி தண்ணீர் மற்றும் 1 மில்லி கிளிசரால்) மற்றும் ஆக்ஸியோ இமேஜர் M1 நுண்ணோக்கி (கார்ல் ஜெய்ஸ்) பயன்படுத்தி வேறுபட்ட குறுக்கீடு மாறுபட்ட நுண்ணோக்கி மூலம் கவனிக்கப்பட்டது.
செங்குத்தாக வைக்கப்பட்டுள்ள தகடுகளில் வளர்க்கப்பட்ட 7 நாள் வயதுடைய நாற்றுகளில் வேர் கோணங்கள் அளவிடப்பட்டன.படி 6 இல் விவரிக்கப்பட்டுள்ளபடி புவியீர்ப்பு திசையன் திசையிலிருந்து வேரின் கோணத்தை அளவிடவும்.
நெறிமுறை 37 இல் சிறிய மாற்றங்களுடன், கார்டிகல் நுண்குழாய்களின் ஏற்பாடு விவரிக்கப்பட்டது.ஆன்டி-டியூபுலின் ஆன்டிபாடி (KMX-1, Merk Millipore: MAB3408) மற்றும் Alexa Fluor 488-conjugated anti-mouse IgG (Thermo Fisher Scientific: A32723) ஆகியவை முதன்மை மற்றும் இரண்டாம் நிலை ஆன்டிபாடிகளாக 1:1000 மற்றும் 1:100 டைலூஷன்களில் பயன்படுத்தப்பட்டன. முறையே.TCS SPE கன்ஃபோகல் லேசர் ஸ்கேனிங் மைக்ரோஸ்கோப்பை (லைக்கா மைக்ரோசிஸ்டம்ஸ்) பயன்படுத்தி ஃப்ளோரசன்ஸ் படங்கள் பெறப்பட்டன.Z-ஸ்டேக் படங்களைப் பெற்று, உற்பத்தியாளரின் அறிவுறுத்தல்களின்படி அதிகபட்ச தீவிரம் கணிப்புகளை உருவாக்கவும்.
உற்பத்தியாளரின் அறிவுறுத்தல்களின்படி செல் கவுண்டிங் கிட் 8 (டோஜிண்டோ) ஐப் பயன்படுத்தி ஹெலா செல் பெருக்க மதிப்பீடு செய்யப்பட்டது.
E. coli DH5α இன் வளர்ச்சியானது 600 nm (OD600) இல் ஸ்பெக்ட்ரோஃபோட்டோமீட்டரைப் பயன்படுத்தி கலாச்சாரத்தில் செல் அடர்த்தியை அளவிடுவதன் மூலம் பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டது.
CSU-X1 கன்ஃபோகல் ஸ்கேனிங் சாதனம் (யோகோகாவா) மற்றும் sCMOS கேமரா (சைலா, ஆண்டோர் டெக்னாலஜி) பொருத்தப்பட்ட ஃப்ளோரசன்ஸ் நுண்ணோக்கியைப் பயன்படுத்தி டிரான்ஸ்ஜெனிக் BY-2 செல்களில் சைட்டோஸ்கெலிட்டல் அமைப்பு காணப்பட்டது.சைட்டோஸ்கெலிட்டல் அடர்த்தி பட பகுப்பாய்வு மூலம் மதிப்பிடப்பட்டது, இது விவரிக்கப்பட்டுள்ளபடி ImageJ மென்பொருளைப் பயன்படுத்தி கன்ஃபோகல் படங்களில் சைட்டோபிளாஸ்மிக் பிக்சல்களில் சைட்டோஸ்கெலிட்டல் பிக்சல்களின் சதவீதத்தை அளவிடுகிறது.
BY-2 செல்களில் உயிரணு இறப்பைக் கண்டறிய, செல் இடைநீக்கத்தின் ஒரு அலிகோட் அறை வெப்பநிலையில் 10 நிமிடங்களுக்கு 0.05% எவன்ஸ் நீலத்துடன் அடைகாக்கப்பட்டது.இறந்த உயிரணுக்களின் தேர்ந்தெடுக்கப்பட்ட எவன்ஸ் நீல நிறக் கறை, பிளாஸ்மா சவ்வு மூலம் சாத்தியமான உயிரணுக்களிலிருந்து சாயத்தை வெளியேற்றுவதைப் பொறுத்தது.ஒரு பிரகாசமான புல நுண்ணோக்கி (BX53, ஒலிம்பஸ்) பயன்படுத்தி கறை படிந்த செல்கள் காணப்பட்டன.
ஹெலா செல்கள் DMEM இல் 10% FBS உடன் 37°C மற்றும் 5% CO2 இல் ஈரப்பதமான இன்குபேட்டரில் வளர்க்கப்பட்டன.செல்கள் 100 μM KAND 11, kumamonamic அமிலம் 6, kumamonamide 1, 100 ng/ml colcemid (Gibco), அல்லது 100 ng/ml Nocodmaze (சிக்மா) 6 மணிநேரத்திற்கு 37 ° C இல் சிகிச்சை அளிக்கப்பட்டது.செல்கள் 10 நிமிடங்களுக்கு MetOH உடன் சரி செய்யப்பட்டது, பின்னர் அறை வெப்பநிலையில் 5 நிமிடங்களுக்கு அசிடேட்டுடன் சரி செய்யப்பட்டது.நிலையான செல்கள் β-டூபுலின் முதன்மை ஆன்டிபாடியுடன் (1D4A4, புரோட்டீன்டெக்: 66240-1) 0.5% BSA/PBS இல் 2 மணிநேரம் நீர்த்தப்பட்டு, TBST உடன் 3 முறை கழுவப்பட்டு, பின்னர் அலெக்சா ஃப்ளூர் ஆடு ஆன்டிபாடியுடன் அடைகாக்கப்பட்டது.488 1 மணிநேரம்.– மவுஸ் IgG (தெர்மோ ஃபிஷர் சயின்டிஃபிக்: A11001) மற்றும் 15 ng/ml 4′,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) 0.5% BSA/PBS இல் நீர்த்தப்பட்டது.மூன்று முறை TBST கொண்டு கழுவிய பிறகு, Nikon Eclipse Ti-E தலைகீழ் நுண்ணோக்கியில் படிந்த செல்கள் காணப்பட்டன.MetaMorph மென்பொருளை (மூலக்கூறு சாதனங்கள்) பயன்படுத்தி குளிரூட்டப்பட்ட Hamamatsu ORCA-R2 CCD கேமரா மூலம் படங்கள் எடுக்கப்பட்டன.